科研小怪瘦
染完以后的片子底色很脏,有絮状丝,所以把BSA 封闭液换成了快速封闭,底片干净了,但是组织及组画笔以内发黄,整张片子几乎都是阳性,染完苏木素变所有组织成了棕黑色的(一抗浓度稀释到最低浓度,且DAB换了新的依旧全部假阳性,脱蜡试剂也换了新的),请问是哪一步试剂出问题了哇,求大佬帮助(核染)
晓雨知春来
可能是由于染色反应过度导致的。试试将染色反应的时间缩短,以减少过度染色的可能性。此外,确保使用适当稀释的一抗,并在染色反应之前彻底洗涤样本。
sswei
背景脏不一定是因为仪器不干净造成的,也有可能是蛋白降解或者整个实验过程中条件不合适造成的,提取蛋白选择合适的蛋白裂解液,充分去除一些干扰因素,比如核酸,多糖,脂类等; 建议蛋白在测量浓度后变性分装保存,避免反复冻融使蛋白发生降解
loveliufudan
根据你提到的现象有以下分析:
1. 片子底色脏、有絮状丝:这可能是由于未彻底清洁玻片或使用了不合适的试剂导致的。确保在染色前充分清洗玻片,并使用高质量的试剂。
2. 组织及组画笔发黄:这可能是由于染色过程中的问题,例如使用过期或不适合的试剂,或者固定或处理步骤不当。检查染色步骤,确保使用新鲜的试剂并正确处理组织样本。
3. 所有组织呈棕黑色:这可能是由于染色反应过度导致的。试试将染色反应的时间缩短,以减少过度染色的可能性。此外,确保使用适当稀释的一抗,并在染色反应之前彻底洗涤样本。
4. 假阳性:假阳性的出现可能与多种因素有关,如非特异性结合、背景污染或处理步骤问题。确保使用高质量的试剂,并优化染色步骤和条件以最小化假阳性的可能性。
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