医学海洋的浮萍
本人最近在做CD80和CD206小鼠的巨噬细胞极化,不知道什么欢迎一直未染上色,请圈内的大神赐予我一个protocol,万分感谢!
loveliufudan
以下是一个基本的RAW264.7巨噬细胞极化的CD86和CD206的流式双染实验协议。请注意,该协议可能需要根据实验条件和实验室特定要求进行优化和调整。
材料:
- RAW264.7巨噬细胞
- 细胞培养基(适当的培养基根据实验需求选择)
- 胶体金标记的抗CD86抗体
- 荧光标记的抗CD206抗体
- 细胞染色缓冲液(如PBS)
步骤:
1. 将RAW264.7巨噬细胞培养在适当的培养基中,使其达到适当的细胞密度(通常70-80%的密度)。
2. 将细胞收获并离心(速度和时间根据细胞类型和实验要求确定)。
3. 弃掉上清液,并用冷细胞染色缓冲液洗涤细胞一次,然后再次离心。
4. 弃掉上清液,并用冷细胞染色缓冲液悬浮细胞,使其达到所需浓度。
5. 取适量的细胞悬液加入到离心管中,使每个管中含有所需数量的细胞。
6. 向每个管中加入适量的胶体金标记的抗CD86抗体和荧光标记的抗CD206抗体(按照供应商推荐的浓度进行优化,也可根据实验要求自行优化),轻轻混匀。
7. 在4°C条件下,孵育细胞和抗体混合物,保护细胞表面抗原的完整性,一般孵育时间为30分钟至1小时。
8. 孵育结束后,使用冷细胞染色缓冲液洗涤细胞一次,然后离心。
9. 弃掉上清液,并使用冷细胞染色缓冲液再次洗涤细胞一次,然后离心。
10. 弃掉上清液,小心地将细胞悬浮于适量的细胞染色缓冲液中。
11. 将细胞悬液转移到流式细胞术管中,并通过流式细胞仪进行分析。