免疫组化Ki67没有阳性结果

如果在进行免疫组织化学染色（IHC）过程中没有观察到预期的阳性结果，可能有多种潜在问题。以下是一些可能导致问题的因素和建议的解决方法：

1. 组织固定和处理：确保福尔马林固定的组织处理得当，固定时间足够，并且在石蜡包埋和切片制备过程中没有出现问题。确保切片切割质量良好且组织未被破坏。

2. 热修复：柠檬酸钠热修复用于恢复组织中的抗原表达，如果修复时间或温度不足，可能导致抗原未能完全恢复。尝试增加修复时间或尝试其他热修复方法，如EDTA修复。

3. 抗体质量和浓度：确保使用的一抗和二抗是高质量的，并且在适当的浓度下使用。参考文献或生产商的推荐，优化抗体的浓度和孵育时间。

4. 控制组和阳性对照：使用适当的阴性和阳性对照组来验证实验的准确性。确保阴性对照中没有任何非特异性结合，阳性对照应该显示预期的阳性结果。

5. 染色过程：确保每个步骤的时间和温度控制准确，特别是DAB显色和苏木素复染步骤。检查显色反应时间是否足够，并遵循准确的操作步骤。

6. 显微镜观察：使用合适的显微镜观察切片，确保显微镜设置正确，并且有足够的放大倍数来观察细胞和组织细节。

有两种可能：1、真阴性结果：整个染色过程没有出现问题，组织或细胞确实不表达与抗体相关的抗原。2、假阴性结果：即此阴性结果不是真实的反映。假阴性结果又可分为两种情况：(1)切片中根本就不包含所预期检查的组织或细胞。出现这种情况，可能是选择错了切片或选错了抗体。获得正确的切片进行染色是获得正确结果的前提。由此表明：制作出合格的免疫组化切片是至关重要的。(2)染色过程中的某一或某些环节出了问题。比如，组织未进行抗原修复，有的组织必须经过抗原修复才能检测抗原表达；或选用了只能用于冰冻组织而不能用于石蜡包埋组织的抗体；或一抗失效，抗体长期不用和/或已超过有效期是主要的原因。

单纯看步骤是没有问题的，但是各步骤的时间会导致失败，比如说孵育时间或者热修复温度时间不够都是会导致失败的。