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PVDF膜上包被了抗原,HRP酶标记了抗体,然后单组分的TMB沉淀性显色液为显色底物,但是使用配制出来的单组分TMB显色液在膜上显示的条带较浅,不知道大佬们有没有相关的经验或者具备可行的单组分TMB显色液配方,让小弟试一试
loveliufudan
单组分TMB显色液是一种常用的酶标记试剂,可以用于检测Western blot和ELISA等实验中的蛋白质。使用单组分TMB显色液在膜上显示的条带较浅,可能是由于显色液的浓度不足、显色时间不够长等原因造成的。
为了获得更深的显色效果,您可以尝试以下方法:
增加显色液的浓度:可以尝试增加单组分TMB显色液的浓度,但需注意不要过度稀释,以避免背景杂色增加。
延长显色时间:可以延长显色时间,但不要过度延长时间,以避免过多的背景杂色影响结果。
检查试剂质量:如果使用的试剂已经过期或质量有问题,可能会影响显色效果。建议更换新的试剂或者尝试其他品牌的单组分TMB显色液。
调整缓冲液的pH值:显色液的pH值对显色效果也有一定影响,可以尝试调整缓冲液的pH值,以获得更好的显色效果。
以下是比较常用的单组分TMB显色液配方:
10 ml 0.1 M sodium acetate缓冲液,pH 6.0
100 μl 30% H2O2
10 mg TMB
将以上三种试剂混合均匀,光照保护后使用。但是需要注意的是,每个实验可能需要调整配方和显色条件以获得最佳效果。
土井挞克树
可以提高TMB沉陷液的浓度,可能是浓度太低的原因
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