实验室小助理夏奇
最近在提前小鼠肝癌h22肿瘤浸润的淋巴细胞,用的是索莱宝家的小鼠肿瘤浸润淋巴细胞提取试剂盒,尝试了好几次再稀释液和分离液的界面都没看到多少淋巴细胞。
具体步骤是这样的,先在无菌环境摘下肿瘤用眼科剪剪碎,后用0.8mg/ml的一型胶原酶消化30分钟,后用注射器活塞研磨肿瘤浸润组织,过滤网后1500rpm离心五分钟,用稀释液重悬,再过一次滤网,再离心后用稀释液重悬,之后就是按照说明书的方法,离心管里放了分离液5ml,单细胞悬液5ml,然后400g,离心了30min,但是稀释液和分离液的中间没有明显的细胞层,我吸出来在显微镜下看发现基本上没有细胞。
希望大家帮忙看看可能是什么原因,或者大家用其他方法提前til的嘛?
土井挞克树
考虑还是消化和研磨的不充分,增加消化和研磨时间
loveliufudan
可能存在以下问题:
消化时间和胶原酶浓度不够:对于不同类型的肿瘤组织,消化时间和胶原酶浓度都有可能会有所不同。建议您可以适当延长消化时间或者增加胶原酶浓度。
细胞过滤不彻底:在使用活塞硏磨时,如果组织碎片较大或者注射器孔径较小,可能会导致过滤不彻底,从而导致单细胞悬液中存在较多的组织碎片。建议您可以使用更小孔径的注射器或者更细的过滤网,以确保单细胞悬液中只含有单个的细胞。
离心速度和时间不够:离心速度和时间对细胞分离效果有很大的影响。您可以尝试增加离心速度和时间,以提高细胞分离的效率。
如果您的问题仍然无法解决,您可以尝试其他方法提取肝癌H22肿瘤浸润淋巴细胞。例如,使用CD4或CD8的磁珠分选方法可以高效地分离淋巴细胞。
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