毛利小五郎的徒弟
成年鼠脑通常需要2天,幼年不带颅骨的鼠脑通常需要1天,带颅骨则需更久。
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小鼠脑组织制作石蜡切片脱水使用梯度酒精,透明使用二甲苯的时长应当控制在30分钟左右。
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制备小鼠脑组织石蜡切片的基本步骤如下:
固定组织:用4%的中性缓冲福尔马林固定小鼠脑组织,通常固定时间为24-48小时。
脱水:将固定后的组织在梯度酒精中脱水,通常使用70%、80%、95%和100%的乙醇,每个酒精中浸泡时间一般为30分钟至1小时,最后用两次100%乙醇浸泡1小时以确保脱水彻底。
渗透:将脱水后的组织用二甲苯(或其他透明剂)浸泡,浸泡时间一般为1-2小时,直到组织完全透明。
浸渍:将透明的组织在熔点与包埋剂相匹配的蜡中浸泡,通常使用熔点为56-58℃的石蜡,浸泡时间一般为1-2小时,直到组织浸透完全。
包埋:将浸透的组织置于盒中,倒入熔化的石蜡,放置于真空包埋机中,连续抽真空排气,使石蜡充分浸润组织。
切片:将包埋后的组织用石蜡切片机切片,切片厚度一般为4-10μm。
为了保证切片质量,具体操作时间需要根据样品大小、切片厚度和实验条件等因素而定,一般建议参考已有的标准操作流程进行优化。
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梯度酒精逐级脱水10-15分钟,根据材料大小及溶液使用时间长短而定;透明二甲苯视材料而定,肉眼对光观察边缘透光即可。
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