原理
SP（streptavidin-perosidase）法，即链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法。SP法是最常使用的方法。
材料与仪器
二甲苯 酒精 PBS 双氧水 枸橼酸缓冲液 羊血清工作液 辣根过氧化物酶 链霉素 卵白素 苏木素 DAB
冰箱 显微镜 烧杯 玻璃缸
冰箱 显微镜 烧杯 玻璃缸
步骤
1. 烤片：68℃，20 min。
2. 常规二甲苯脱蜡，梯度酒精脱水：二甲苯I 20 min⇒二甲苯II 20 min⇒00%酒精10 min⇒100%酒精10 min⇒95%酒精5 min⇒80%酒精5 min⇒70%酒精5 min。
3. 阻断灭活内源性过氧化物酶：3%H2O2 37℃孵育10 min，PBS冲洗3X5 min。
4. 抗原修复：置0.01 M枸橼酸缓冲液（PH6.0）中用煮沸（95℃，15-20 min），自然冷却20 min以上，再用冷水冲洗缸子，加快冷却至室温，PBS冲洗3X5 min。
5. 正常羊血清工作液封闭，37℃10 min，倾去勿洗。
6. 滴加一抗4℃冰箱孵育过夜，PBS冲洗3X5 min（用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照）；滴加生物素标记二抗，37℃孵育30 min，PBS冲洗3X5 min。
7. 滴加辣根过氧化物酶标记的链霉素卵白素工作液，37℃孵育30 min，PBS冲洗3X5 min。
8. DAB/H2O2反应染色，自来水充分冲洗后，苏木素复染，常规脱水，透明，干燥，封片。
来源：丁香实验
