链霉菌抗生物素蛋白―过氧化物酶法

ABC法虽然是一种很好的方法，但是在实际应用过程中．确实也存在许多问题，如亲和 素中含有约?％的糖类，它可与组织中含糖基的物质起反应，造成背景着色。亲和素的等电 点约为10左右。可带较多的负电荷，纤维组织可带较多的正电荷，这两种电荷可互相吸引，造成背景着色。亲和素中有4个结合点，其中一半与连接抗体结合，另一半与复合物结合，如此可降低其敏感性。

为解决和克服存在的问题，20世纪90年代初提出了用链霉亲和素(streptavidin)替代ABC法中的亲和素―生物素复合物，形成链霉菌抗生物素蛋白―过氧化物酶法(streptavidin-peroxidasemethod。SP法)。链霉亲和素是从链霉菌中分离出的一种蛋白，含有四个亚基，每个亚基均具有与生物素亲和力极高的结合点。

链霉亲和素的四个亚基可以全部和二抗上的生物素结合，故又称链霉菌抗生物素蛋白，它对组织穿透性强，反应速度快。链霉亲和素的等电点为5.5～6.7，接近中性，所带的负电荷少，不容易与组织中的正电荷发生相互吸引，因而可降低背景着色。此外，链霉亲和素不含糖基，不存在与组织中含糖基类物质起反应的现象。该放大系统不含生物素，可以免除由内源性生物素所造成的背景着色，因此背景清晰，无非特异性染色，阳性反应物突出，明显易辨。从某种意义上讲，SP法比ABC法的敏感性至少高一倍以上。由于它的敏感性强，效果好，因此更受研究者欢迎。