原理
PAP 的基本原量是在间接法的基础上，即在加完酶标二抗以后，再加一个PAP 复合物（过氧化物酶一抗过氧化物酶抗体复合物）。PAP 复合物为由3 个酶分子和2个抗酶抗体亚单位构成的复环形复合物，其稳定性很强，冲洗时不会脱落。在这种方法中，PAP 复合物中的抗酶抗体与特异性一抗必须来自同一种属动物。其优点是比间接法更为灵敏，而且背景染色体。
材料与仪器
抗体
PBS H2O2 血清 DAB 苏木精
显微镜
PBS H2O2 血清 DAB 苏木精
显微镜
步骤
1. 标本固定后，PBS洗涤；
2. 1 %H2O2（或1 %H2O2甲醇）阻断内源性过氧化物，室温10～20 分钟；
3. PBS洗2×3 分钟；
4. 正常血清（二抗的正常血清）孵育，室温20 分钟；
5. 滴加一抗，室温1 小时或4 ℃过夜；
6. PBS洗3×3 分钟；
7. 滴加二抗，室温30 分钟；
8. PBS洗3×3 分钟；
9. 加PAP复合物，室温60 分钟；
10. PBS洗涤3×3 分钟；
11. 0.04 %DAB+0.03 %H2O2显色5～10 分钟；
12. 充分水洗；
13. 苏木精复染，封片观察。
2. 1 %H2O2（或1 %H2O2甲醇）阻断内源性过氧化物，室温10～20 分钟；
3. PBS洗2×3 分钟；
4. 正常血清（二抗的正常血清）孵育，室温20 分钟；
5. 滴加一抗，室温1 小时或4 ℃过夜；
6. PBS洗3×3 分钟；
7. 滴加二抗，室温30 分钟；
8. PBS洗3×3 分钟；
9. 加PAP复合物，室温60 分钟；
10. PBS洗涤3×3 分钟；
11. 0.04 %DAB+0.03 %H2O2显色5～10 分钟；
12. 充分水洗；
13. 苏木精复染，封片观察。
来源：丁香实验
