原理
先将酶与抗体结合形成酶标抗体，然后和相应的抗原反应，使抗原抗体复合物上带有酶分子，再与酶的底物H2O2—DAB（3’3—二胺荃联苯胺）发生显色反应，在显微镜下观察，根据颜色产物检测相应抗原。
材料与仪器
抗体
PBS H2O2 血清
显微镜
PBS H2O2 血清
显微镜
步骤
1. 标本固定；
2. PBS洗涤2×3 分钟；
3. 1 %H2O2（或1 %H2O2甲醇）抑制内源性过氧化物酶，室温10～20 分钟；
4. 正常血清（1：10）孵育，室温20 分钟；
5. 滴加酶标记的抗体37 ℃1 小时或4 ℃过夜；
6. PBS洗3×3 分钟；
7. DAB+H2O2显色5～10 分钟，镜下控制染色结果。DAB+H2O2应于用前15 分钟配制。
8. 充分水洗后，复染、脱水、透明、封片、镜检。
2. PBS洗涤2×3 分钟；
3. 1 %H2O2（或1 %H2O2甲醇）抑制内源性过氧化物酶，室温10～20 分钟；
4. 正常血清（1：10）孵育，室温20 分钟；
5. 滴加酶标记的抗体37 ℃1 小时或4 ℃过夜；
6. PBS洗3×3 分钟；
7. DAB+H2O2显色5～10 分钟，镜下控制染色结果。DAB+H2O2应于用前15 分钟配制。
8. 充分水洗后，复染、脱水、透明、封片、镜检。
注意事项
直接法的优点是特异性高，非特异性染色轻，缺点是敏感性低，必须对第一种抗体都进行标记，操作不便，目前只用于单克隆抗体的筛选及酶联免疫吸附试验。
来源：丁香实验
