免疫荧光组织化学直接法

免疫荧光组织化学直接法

 

    (1)检查抗原法：此法是免疫组织化学最早使用的方法，用荧光素标记已知特异性抗体，直接与组织细胞中相应抗原结合，在荧光显微镜下可见抗原存在部位呈现特异性荧光。此法特异性强，快速而简便，但是，由于一种荧光抗体只能检测一种抗原，很难获得各种市售的特异性荧光标记抗体；此外，该方法敏感性较低。

(2)检查抗体法：将抗原标记荧光素，即为荧光抗原。将此荧光抗原直接与细胞或组织内相应抗体反应，即可定位检测出相应的特异性抗体。

免疫荧光级胞化学直接法示意图

 

    直接法简便而快速，适合检测浓度较高的蛋白质抗原，如肾脏、皮肤抗原的检查。在临床上也常用于细菌、螺旋体、原虫及真菌的检测。该法基本染色步骤如下：

    1．染色  切片经固定后，滴加经稀释至染色效价的荧光标记特异性抗体，置人湿盒内，室温或37~C染色30分钟。

    2．洗片  洗去存留的荧光抗体，将切片浸入pH 7．2～7．4的PBS中振荡或摇动洗涤2次，每次5分钟，再用蒸馏水洗1分钟，除去盐结晶。

    3．封固和观察  用50％甘油缓冲液(pH 9．0～9．5的0．5mol／L磷酸盐缓冲液配置)封固或用抗淬灭剂封固后，置荧光显微镜下观察。

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