免疫荧光组织（细胞）化学染色方法：直接法

一、原理与意义

免疫荧光组织（细胞）化学染色方法——直接法，是一种荧光抗体染色法。该方法比较简单，适合做细菌、螺旋体、原虫、真菌及浓度较高的蛋白质抗原如肾、皮肤的检查和研究。此法每种荧光抗体只能检查一种相应的抗原，特异性高而敏感性较低。

二、操作流程

1、染色：切片经固定后，滴加经稀释至染色效价如1：8或1：16的荧光抗体（如兔抗人γ-球蛋白荧光抗体或兔抗人IgG或IgA荧光抗体等），在室温或37℃染色30min，切片置入能保持潮湿的染色盒内，防止干燥。

2、洗片：倾去存留的荧光抗体，将切片浸入pH7.4或pH7.2 PBS中洗两次，搅拌，每次5min，再用蒸馏水洗1min，除去盐结晶。

3、用50%（用0.5mol/L碳酸盐缓冲液pH9.0～9.5）甘油封固，并镜检拍照。

4、对照染色

①正常免荧光血清染色，如上法处理切片，结果应为阴性。

②染色抑制试验（一步法）：将荧光抗体和未标记的抗体球蛋白或血清（相同）等量混合，如上法处理切片。结果应为阴性。为证明此种染色抑制不是由于荧光抗体被稀释所致，可用盐水代替未标记抗血清，染色结果应为阳性。此法结果较二步法稳定。

③类属抗原染色试验，前面已作叙述。