材料与仪器
蜡块切片
多聚甲醛 蒸馏水 蔗糖 过氧化氢 甲醇 PBS 酒精 KPBS 牛血清白蛋白 叠氮纳 一抗 二抗
冰箱 显微镜 烧杯
多聚甲醛 蒸馏水 蔗糖 过氧化氢 甲醇 PBS 酒精 KPBS 牛血清白蛋白 叠氮纳 一抗 二抗
冰箱 显微镜 烧杯
步骤
1. 4%多聚甲醛常规灌注固定，取材并置20%蔗糖溶液（4℃）中过夜。蜡块制作。切片，贴片。0.01 M KPBS清洗5 min×3后；
2. 加入配好的0.3%的过氧化氢甲醇溶液（甲醇80 ml+0.01 M KPBS 100 ml+30%过氧化氢）30 min，以消除内源性过氧化物酶的影响，0.01 M PBS清洗5 min×3；
3. 加入配好的0.3% Triton X100（30% Triton X100+0.01 M KPBS 100 ml）30 min，以增加细胞的通透性，0.01 M KPBS清洗5 min×3；
4. 加入用血清稀释液（牛血清白蛋白1.00 g+0.01 M PBS 100 ml+叠氮纳0.08 g）稀释的一抗，4℃存放24-48 h；吸去抗体，0.01 M KPBS洗5 min×3；
5. 加入0.01 M KPBS稀释的的二抗，室温孵育2 h。0.01 M KPBS洗5 min×3；
6. 加入ABC复合物之类的抗体，室温孵育2 h，0.01 M KPBS洗5 min×3；蒸馏水迅速冲三次；
7. 加入显色液，进行免疫组织化学显色，时间一般不超过30 min，可不时在显微镜下进行观察，待细胞着色而背底颜色较淡时马上吸去显色液，用蒸馏水迅速冲三次后加入0.01 M KPBS终止反应；
8. 梯度酒精脱水之后，封片，拍照。
来源：丁香实验
