如何制作一张满意的血涂片
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1 玻片的清洗
将玻片放入肥皂或洗衣粉中煮沸 20 min; 用热水将肥皂和血膜等污物洗去, 用自来水反复冲洗, 再用蒸馏水冲洗 3 次～5 次。必要时再置 95% 酒精浸泡 1 h, 然后擦干或烘干备用.新玻片先置 95% 酒精浸泡或 10% 盐酸浸泡 24 h, 然后用水彻底清洗。
2 标本的采集
首先用 75% 酒精将无名指消毒待酒精干后, 刺破皮肤, 使血液自然流出, 切勿用力挤压。取干净载片, 让血滴在离载片 4mm ～5 m m 处, 注意手指持握载片的边缘, 勿触及其表面, 不能使载片接触取血部位的皮肤, 取血后要迅速推片以防血液凝固, 如果从抗凝管取血则血液必需新鲜, 否则造成血细胞的破坏。
3 血涂片的制备
玻片要求: 1. 0 mm×26 mm ×( 76±0. 5) mm; 推片要求:推片边缘整齐、平滑; 血涂片的好坏与血滴大小、推片角度、推片速度直接有关, 推片时, 血滴愈大, 角度愈大, 推片速度愈快则血膜愈厚, 反之血膜愈薄, 血膜分布不匀主要是推片不齐用力不均, 玻片不洁所致。制作一张均匀的血涂片必需用力均匀,角度始终不变, 如果用力太轻, 则涂抹膜太厚无法观察且不能推第二次; 用力太重又会损伤血细胞。制成后可在空气中挥动使其迅速干燥, 以免血细胞皱缩。同时血膜干燥后, 最好立即固定染色, 避免细胞遭受污染而使之溶解, 久放后效果不佳; 血膜片要求: 血膜均匀, 薄如蝉翼, 尾端形如弧状, 血膜具有头体尾不同厚薄区域。注意考虑患者的血液状态, 如贫血程度, 血液黏稠度, 白细胞或有核细胞多少等因素, 调整推片技巧。
4 血涂片染色
目前市售瑞氏快速染液对观察细胞形态快而清晰, 但是染液往往破坏红细胞, 因此必须用传统的瑞氏染液先覆盖在血膜上, 再加入快速瑞氏染液, 最后加入缓冲液, 其量要充足并充分混匀。染色时间: 在夏季缓冲液和染液易多一些, 时间相对要短一些, 否则染液很快蒸发, 染料沉积于细胞上, 不易辨认影响读片效果。如染色太浅, 可按照原来步骤重染。在用自来水冲洗时要缓慢冲洗, 使染色液沉渣及染色粒浮去, 使其充分起分色作用, 去除细胞染色中浮色, 显示出胞核结构及细胞清晰形态、待干、镜检。涂片如有色渣, 可用三种方法清除: 一是再加伊红- 甲基蓝染液于涂片上, 略加摆动, 使色渣溶于甲醇中, 待甲醇挥发, 加蒸馏水或缓冲液。二是把血片放水槽中, 保持水平, 色渣即从玻片边缘溢出。三是把血片呈 45°倾斜, 吸 95% 酒精徐徐滴涂片面, 至流下酒精变蓝后, 清水冲净晾干。涂片如有香柏油, 用擦镜纸擦去仍可用酒精处理。判断染液是否起到了染色的作用, 可在冲洗染色液前观察染液有无一层黄色的金属光泽, 如果没有, 则表示染色失败。
5 检验人员的素质
在制作高质量血膜片的同时需要检验人员具有扎实的基本功和丰富的工作经验. 对各种细胞的正常形态及细胞形态的特异性改变要熟练的掌握, 同时对不同的细胞在血膜大致分布要清楚的认识, 对一张不满意的血片要分析判断找出失败的愿因. 周围血涂片检查通常包括以下几项。
红细胞形态: 红细胞大小和血红蛋白含量改变: 小红细胞、大红细胞、巨红细胞、红细胞大小不均、低色素、正色素、多嗜色性。红细胞形态改变: 靶形红细胞、球形红细胞、椭圆形红细胞,口形红细胞、镰形红细胞、畸形红细胞。红细胞中的异常结构:包 括 碱 性 点 彩 红 细 胞、How ell - Jo lly 小 体、Cabots 环,Pa ppenheimer 小体等。
粒细胞形态: 粒细胞有无中毒性变化, 如中毒颗粒、空泡变性、核凝集、核溶解、Po hhe 小体。中性粒细胞有无核左移、核右移甚至分叶过多现象。涂片中有无异常细胞和幼稚细胞, 如白血病细胞及其形态变化( 如 Auer 小体) 、异常淋巴细胞、胞体巨大分叶过多的中性粒细胞, 有无 Pelg er- Huet 核异常, 浆内含 Alder- Reilly 体或 Chediak- Hig ashi 颗粒等。
血小板形态: 观察其大小、颗粒的分布, 是否成簇成堆分布, 寻找有无巨大血小板及小巨核细胞。因此, 一张好的血涂片从清洗到制作、染色每一个环节都要细致, 耐心任任真真完成每一个环节, 这样才能更好地观察细胞形态为临床医生提供可靠、真实的检验报告, 更好地为临床服务。
作者：太原市中心医院 张卉
