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WB转膜为什么一张膜有蛋白,另一张没有呢

相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

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WB转膜为什么一张膜有蛋白,另一张没有呢

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3 个回答

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loveliufudan

有帮助

可能有以下几个原因:

1. 转膜条件不均匀:转膜时,电流密度、时间和电场的均匀分布都非常重要。如果转膜条件不均匀,可能导致蛋白在膜上的分布不均匀。这可能是由于不同区域之间的电阻差异,或电泳槽中的电流不均匀分布等原因。您可以尝试优化转膜条件,确保电流均匀分布,并且蛋白能够均匀地转移到膜上。

2. 样品加载量不均匀:如果您在转膜之前加载的样品在不同区域上有差异,那么膜上的蛋白分布也会不均匀。确保在进行SDS-PAGE电泳之前,将样品均匀地加载到凝胶上,避免在转膜时出现不均匀的蛋白分布。

3. 转膜效率差异:不同蛋白质可能具有不同的转移效率。一些蛋白质可能更容易转移到膜上,而其他蛋白质可能由于其特定的物理化学特性而不易转移。这可能是由于蛋白质的大小、疏水性或电荷等因素。在选择转膜条件时,要考虑样品中存在的不同蛋白质的特性,并可能需要调整转膜条件以增加转膜效率。

4. 膜的质量或处理差异:不同批次的膜可能具有不同的质量和性能。确保使用质量良好的膜,并遵循适当的处理和保管方法。如果使用的膜来自不同的供应商或不同的批次,可能会出现蛋白分布差异。

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毛利小五郎的徒弟

有帮助

建议看看一抗和二抗的抗性是否正确,然后用BCA试剂盒检测一下蛋白浓度,看看是不是蛋白含量太少,如果曝光出actin可以将转膜条件设置为350mA 1.5h试一下。

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sswei

有帮助

可能是操作过程中有问题(可能原因是(1)、结合底物会不会有问题,即没有充分结合好,或者结合时间太短,(2)、要确定两张膜都是用新的底物反应液,(3)、就是没有信号的膜会不会压片时间太短。

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