血涂片制备与染色

血涂片是通过特定的方法将血液按一定方向均匀涂开的过程，微观上使细胞是由球形变为平面形或近平面形平铺在载玻片上。血涂片的显微镜检查是血液细胞形态学检查的基本步骤，特别是对于各种血液病的诊断和鉴别诊断，具有重要价值。血涂片制备是否合格、染色的好坏直接关系到检验结果的质量。

（一）血涂片制备

1.载玻片的准备

新载玻片常带有游离碱质，须用浓度为lmol/L的HCl浸泡24h，再用清水彻底冲洗，干燥后备用。旧载玻片要用含洗涤剂的清水中煮沸20min，洗掉血膜，再用清水反复冲洗，最后用0.95L/L乙醇浸泡1h，干燥备用。

使用载玻片时，不要用手触及玻片表面，保持玻片清洁、干燥、中性、无油腻。

2.血涂片制作方法

取血液标本一滴置载玻片的一端，以边缘平滑的推片一端，从血滴前沿方向接触血液，使血液沿推片散开，推片与载玻片保持30～45○夹角，平稳地向前推动，血液即在载玻片上形成薄层血膜。医学教育网

涂片的厚薄与血滴大小、推片与载玻片之间的角度、推片时的速度及血细胞比容有关。血滴大、角度大、速度快则血膜越厚；反之则血膜越薄。

一张良好的血涂片，要求厚薄适宜，头体尾明显，细胞分布均匀，血膜边缘整齐并留有的空隙。

（二）血涂片染色

染色的目的是使细胞的主要结构，如细胞膜、细胞质、细胞核等染上不同的颜色，以便于镜下观察识别。

血涂片染色包括两个过程：固定和染色。固定是将细胞蛋白质和多糖等成分迅速交联凝固，以保持细胞原有形态结构不发生变化。常用的染色方法有瑞特染色法（Wright）、姬姆萨染色法（Giemsa）等。医学教育网

1.瑞特（Wright）染色法

本法的特点是将固定和染色合并在一起进行，手续简便，染色时间短，对白细胞特异性颗粒着色较好，但对核的着色略差。

2.姬姆萨（Giemsa）染色法姬姆萨染料由天青和酸性染料伊红组成的复合染料。染色原理、缓冲液与瑞特染色法大致相同。本法对细胞核结构和寄生虫着色较好，结构显示更为清晰，但细胞质和颗粒着色较差。

3.瑞－姬染色法

瑞特染色液和姬姆萨染色液对细胞进行染色时有各自的显色特征，前者对细胞浆和颗粒着色较好，后者对对细胞核结构显示清晰。

因此将瑞特染料和姬姆萨染料混合，甲醇溶解后组成瑞－姬染色液能取长补短，优势互补，其中所使用的缓冲液与瑞特染色法相同。用该混合染液对血细胞进行染色，细胞核、细胞浆和细胞内颗粒着色均有上佳表现，着色鲜艳，对比鲜明，是临床上广泛使用的方法。