免疫组化标本突然大量脱片

大量脱片问题考虑你的试剂浓度是否合适，同时你的载玻片有没有问题，普通的载玻片需要度明胶，也可以直接买黏附性的载玻片，贴的时候不要弄反。

如果你的前处理没有问题的话可以在温箱内多烤些时间，一般60度过夜；如果还是不好也可以在烤片机上烤一两个小时。而烤片机的温度通常是78度。你可以根据自己的情况作一下调整，但延长烤片时间是解决脱片的一个不错的办法。

非特异性染色可能来源于两个方面，一是抗体的质量不好，二是用的是生物素-卵白素的检测系统但是没有用相应的封闭。抗体不纯或特异性差都可以适成非特异染色。如果是自己的抗体可以做一下纯化，如果是商业化的抗体则最好用单抗。封闭可以用免疫血清也可以用脱脂奶粉，效果都不错。

这可能是由于梯度酒精浸泡引起的细胞膜和细胞质骤然脱离导致的。

梯度酒精浸泡是一种用于细胞固定和溶解的化学处理方法。梯度酒精浸泡通常使用不同浓度的乙醇和丙酮混合物，逐渐增加浓度来促进细胞膜的渗透和细胞质的凝固。这种处理方法可以导致细胞内部结构的改变和固定，从而有利于后续的染色和显微镜观察。

然而，如果梯度酒精浸泡时间过长或浓度过高，会导致细胞膜和细胞质脱离，从而使细胞失去了完整性。因此，大量细胞脱离玻片可能是由于浸泡过程中细胞完整性破坏造成的。建议优化梯度酒精浸泡的时间和浓度，以获得最佳的细胞固定效果。

考虑是脱水过度，这只能重新制作切片了。

大量脱片原因:

（1）多聚赖氨酸玻片质量的问题。

（2）组织切的不好，切片机的问题例如比较老的旧的机器切的厚或者不均匀，或者切片者手法不好等。

（3）组织的问题，组织有坏死之类越容易脱。

（4）没烤好，时间短温度不够之类。

（5）操作的时候甩的太猛了，有脱片嫌疑的片子最好不甩或轻轻甩，用卫生纸从边缘上慢慢吸水。

（6）修复的问题：抗原修复的时候高压时间过长了，或者放进100度的修复液时手法不好，咚的一声就丢进去了，这样超容易脱片。此外，用EDTA修复比柠檬酸容易脱片，但是要用到EDTA的时候也没办法，只有从另外的问题上着手。

（7）此外，一旦见到有组织漂起来操作就更加要谨慎，用PBS的时候尽量用泡的，不要冲。基本上把这些方面都注意到了，能改善的尽量改善，脱片可以减少很多。