免疫组化中如何防止脱片
丁香园
听到很多人抱怨，在免疫组化实际操作中遭遇过组织易脱片的问题，今天我将结合一些个人经验，与大家分享简单易操作的解决方法。
方法一：
使用防脱玻片，组织当然是越新越好。
方法二：
某些免疫组化染色时候，需要涉及多种抗原修复方法，如某实验需要双修复（热修复和酶修复），热修复相对来说是比较剧烈的（如放在 EDTA 中煮 1 min），沸腾的液体对组织还是有很大的冲击力的，此时组织容易脱，如果热修复放在酶修复后，则组织更容易脱，相反如果将不剧烈的酶修复放在热修复后，可以减少脱片的发生。
但很多时候知道这些似乎解决不了问题，不少研友们由于读研时间仅仅 3 年，重新收集新鲜标本显然不可能，回顾性研究中，某些病例比较罕见，活检取出组织也相对宝贵，且由于当时条件限制等多种原因造成如下问题：
空白片少，经不起反复折腾；
回顾性研究中不可能使用新鲜的切片组织；
某些单位先前并没有使用防脱载玻片保留组织标本等。
这些给实验科研造成一些困境，以下是本人改良后的方法与心得（以无防脱的非新鲜组织为例，修复方式为热修复和酶修复），脱蜡、水化及后续染色等处理均按原先各自的实验流程处理，这里仅介绍如何防脱。
如上所说，先采用酶修复，后热修复，一般热修复是直接置于相应的修复液中煮沸，期间还有可能使用高压锅。
1. 酶修复
各自抗原特性选择，有些时候酶修复的时间是极其难把握的。时间太长，消化过头容易脱片；时间太短，抗原暴露不充分，这些都影响实验结果。
建议：稀释浓度，延长时间。
缺点：不能使用说明书推荐时间，需要自己摸索几次。
2. 热修复
本人尝试如下改良（理论基础：抗原修复时仅需要组织与修复液接触，且只要薄薄的一层就能反应）。
改良一：
敞开高压锅盖，置一铁架于修复液面，其上放置玻片，玻片上滴加修复液体（铁架高度以沸腾修复液不会触及玻片为妥）。为了防止玻片上的修复液挥发，可在滴加修复液后盖上盖玻片，提供热源使修复液保持沸腾状态，使用热蒸汽加热。
优点：避免了组织在液体中的剧烈沸腾，减少脱片。
缺点：降低了抗原修复的温度，可能导致某些抗原无法达到其修复所需温度，使用此法可能需要适当延长热修复时间。
改良二：
修复液煮沸后，滴加于载玻片上，覆盖盖玻片，用实验室常见的封口膜将玻片和盖玻片包绕（包绕的目的不是为了隔绝空气，而是防止盖玻片移动导致修复液在组织表面挥发，封口膜受热后收缩，即可固定）。将包绕好的玻片置入铁架上，按原先操作继续（可放入高压锅中）。
优点：避免了改良 1 中可能无法达到所需修复温度的问题，可以放入高压锅中。
缺点：所有片子变成平铺展开，一次所能做的片子数目减少。
注意事项：
使用盖玻片后，尤其是使用封口膜后，揭片的过程一定要轻柔，用镊子，避免徒手操作，如遇到揭片困难，可适当用 PBS 冲洗，不可暴力揭片，否则适得其反；
由于每个实验室条件不同，还应根据自己所在实验室条件调整；
免疫组化步骤繁琐，影响因素较多，出现问题要仔细思考。以上两个方法本人亲测可有效解决脱片问题，希望能帮助到大家。
