免疫组化染色中有杂信号怎么办？

青云羡鸟飞KN22

2022-10-12

染色是有非特异性染色是那些原因造成的呢？怎么改进呀？谢谢大佬们

Dr_劉医生

2022-10-15

有帮助

各环节都有，取材的样本是否新鲜，制备的悬液是否有杂志；抗体的特异性怎么样，染色剂的问题，制片的流程，洗片是否干净等等

毛利小五郎的徒弟

2022-10-12

有帮助

1.抗体问题

一抗用多克隆抗体容易出现非特异性染色，建议用高纯度，高效价的针对更具特异性抗原决定簇的单克隆抗体来解决。单克隆抗体很贵，不过结果真的很好。尤其是背景非特异性染色不会太深。真是一分价钱一分货。一抗过期也会造成杯具，所以要注意抗体的有效期。

2.抗体浓度过高/孵育时间过长

一抗浓度太高也是出现非特异性染色的常见原因。解决的办法就是预实验。每次使用新抗体前应该多做预实验，摸索出最理想的工作浓度，不能简单地按照说明书来用。另一个常见原因就是孵育时间过长。解决的办法就是定时器。加上抗体后，立刻调好定时器，提醒自己及时终止反应，就会避免这个问题。

3.DAB染色时间太长/变质

DAB的孵育时间过长，会造成背景非特异性染色。DAB的显色时间不是一成不变的，主要靠自己在显微镜下盯着，一旦出现浅浅的棕色的时候，就要马上冲洗。出现棕色的时间过短，表明抗体浓度过高；出现棕色的时间过长，表明抗体浓度过低。DAB要保存于避光干燥的地方，现用现配，临用前才加入H2O2。

NatureBios

2022-10-12

有帮助