3 个回答
Dr_劉医生
有帮助
各环节都有，取材的样本是否新鲜，制备的悬液是否有杂志；抗体的特异性怎么样，染色剂的问题，制片的流程，洗片是否干净等等
土井挞克树
有帮助
1.抗体问题
一抗用多克隆抗体容易出现非特异性染色，建议用高纯度，高效价的针对更具特异性抗原决定簇的单克隆抗体来解决。单克隆抗体很贵，不过结果真的很好。尤其是背景非特异性染色不会太深。真是一分价钱一分货。一抗过期也会造成杯具，所以要注意抗体的有效期。
2.抗体浓度过高/孵育时间过长
一抗浓度太高也是出现非特异性染色的常见原因。解决的办法就是预实验。每次使用新抗体前应该多做预实验，摸索出最理想的工作浓度，不能简单地按照说明书来用。另一个常见原因就是孵育时间过长。解决的办法就是定时器。加上抗体后，立刻调好定时器，提醒自己及时终止反应，就会避免这个问题。
3.DAB染色时间太长/变质
DAB的孵育时间过长，会造成背景非特异性染色。DAB的显色时间不是一成不变的，主要靠自己在显微镜下盯着，一旦出现浅浅的棕色的时候，就要马上冲洗。出现棕色的时间过短，表明抗体浓度过高；出现棕色的时间过长，表明抗体浓度过低。DAB要保存于避光干燥的地方，现用现配，临用前才加入H2O2。
NatureBios
有帮助
- 样本是否新鲜
- 抗原修复是否合适
- 一抗的特异性
- H2O2封闭
- ihc笔圈号疏水圈防止漏液
- 清洗充分 这些原因可能导致背景 非特异
- 在实验中设置空白对照
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