dxy_aizt8si2
请问大家,我同时做免疫组化和测序,但是两种检测脑组织样本该如何取呢,做免疫组化需要生理盐水和多聚甲醛灌流,但是这样又会影响做测序的取样要求;直接取脑组织液氮冻存做测序,不灌流,又会影响免疫组化的取样,请问遇到这种情况该如何解决呢?
Eason老歌迷
要么你就分开去做这两个实验,要么你就取一半大脑做免疫组化,另一半大脑做测序。
毛利小五郎的徒弟
是否可以双侧大脑半球分开做,这样你的问题就解决了。
juyue2010
一般是脑组织一切为二,一半用于rt实验,另一半固定,走ihc流程
balalaLy
可以只用生理盐水灌注影响不大的
huarenqiang5
我觉得这两个实验不矛盾,建议:
1.大鼠麻醉取脑后,将大脑矢状位切为左右两个大脑半球
2.一个半球迅速分离你需要的脑组织,(其实做RT-PCR需要的组织量是非常少的,我们一般只要20mg),冷冻于液氮中,研磨后就可以提取总RNA了;
3.另一半球放入固定液中,固定足够长的时间,然后酒精中梯度脱水,石蜡包埋等一系列步骤就可以了。(我们大鼠一般都是要灌注固定的,但你RT要新鲜的组织就只能取脑后再固定了,我建议至少固定6h以上)
注意:取了脑后一定要先处理你要RT的那一半脑组织,动作尽量迅速,不然对提取的总RNA质量影响很大的。
dxy_aizt8si2
好的,谢谢您
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