免疫组化实验中如何防止脱片?

1. 玻片的酸处理

使用实验室常用的次强酸清洁液（重铬酸钾120g，浓硫酸200ml，蒸馏水1000ml）浸泡玻片24小时，流水充分冲洗后在用蒸馏水冲洗三遍，置于95%乙醇中浸泡12小时，取出放烘箱中烤干或自然风干。

2. 黏附剂的使用

目前常用的黏附剂有三种：明胶-硫酸铬钾，APES（3—氨丙基—乙氧基甲硅烷），多聚左旋赖氨酸（poly-1—lysine）

（1）明胶-硫酸铬钾，这种方法十分简便实用，不仅用于传统染色，而且能够用于免疫组化、原位杂交等检测，目前实验室大多数时候可以常规用该黏附剂。该方法的美中不足是在pH值高于8.0的碱性环境中（如使用PH9.0的TE抗原修复液）加温到80度以上，切片还是容易脱落，因此选用此种黏附剂时宜采用PH6.0的柠檬酸钠抗原修复液。

（2）APES（3—氨丙基—乙氧基甲硅烷）要用丙酮稀释，而丙酮有导致肝硬化的作用，需注意人身防护。该方法弥补了部分高温碱性溶液脱片的问题。另外，有说法认为已经贴好的片子如果有脱片现象，可用此法浸泡3分钟，晾干后进行下一步，但经本实验室验证效果并不好。

（3）多聚左旋赖氨酸（poly-1—lysine），这种方法相当昂贵。但是，如果进行高压碱性修复，可能总体上效果是最佳的。普通组化实验和免疫组化酸性修复（大多数的情况）则没有必要常规使用。多聚赖氨酸一般常见的分子量有70,000～150,000，150,000～300,000和>300,000，分子量越大，黏附力越强，但相对完全溶解较困难。

切片不能太厚，捞片时贴平整，贴片后烤片要烤干，实验前要烤片，50-60度1小时

可以用以下方法，某些免疫组化染色时候，需要涉及多种抗原修复方法，如某实验需要双修复（热修复和酶修复），热修复相对来说是比较剧烈的（如放在 EDTA 中煮 1 min），沸腾的液体对组织还是有很大的冲击力的，此时组织容易脱，如果热修复放在酶修复后，则组织更容易脱，相反如果将不剧烈的酶修复放在热修复后，可以减少脱片的发生。

使用防脱玻片，组织当然是越新越好