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磁珠分选和流式分选中对细胞的处理过程有什么不同?

相关实验:免疫磁珠分选免疫细胞及其亚群

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哎呀哎呦薇


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4 个回答

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毛利小五郎的徒弟

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流式分选需要先制备单细胞悬液,然后染色才能进行分选

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huarenqiang5

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磁珠分选与流式进行分选的比较见下图:



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loveliufudan

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主要区别在于对细胞的处理过程不同。

1.磁珠分选

磁珠分选是通过磁珠的特殊物理性质,对细胞进行筛选和纯化的技术。首先,将带有特定抗体的磁珠与目标细胞结合,然后通过磁场的作用,将与磁珠结合的细胞分离出来。分选结束后,可通过去除磁场或改变磁场的方向,使磁珠和细胞分离。

磁珠分选对细胞的处理过程相对温和,可以不需要对细胞进行显微操作,也不需要对细胞进行荧光标记。磁珠分选操作相对简单,需要的仪器设备相对便宜,但对于细胞的分选纯度可能会受到限制。

2.流式分选

流式分选是通过对细胞进行荧光标记,然后将细胞以单个细胞的形式通过流式细胞仪进行检测和分离的技术。首先将细胞标记成不同的荧光颜色,然后将荧光标记的细胞以单个细胞的形式通过流式细胞仪进行检测和分离。流式细胞仪通过检测荧光颜色、大小、形状等特征,可以对单个细胞进行快速准确的分选和分类。

与磁珠分选相比,流式分选需要对细胞进行荧光标记,要求细胞的表面有特异性的抗原,因此有一定的局限性。流式分选的仪器设备较为复杂,且需要专业技能的操作,操作成本较高。但流式分选具有高分辨率、高灵敏度、高通量的优点,可分离出极高纯度的细胞。

因此,选择磁珠分选或者流式分选,需要根据实验要求和研究目的来决定。

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sswei

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不同之处:

1、对细胞的刺激。 我觉得磁珠分选最大的优势就是对细胞的刺激要小一点。因为流式分选细胞首先要经过几十微米的喷嘴,然后要被充电,还要经过几千伏的电场,最后以几十米每秒的速度落到收集管里面,有些原代细胞就受不了,分选免疫细胞也要考虑细胞活化的影响;而磁珠分选相对来说就对细胞没什么刺激。

2、设备要求。 磁珠分选小的实验室就能做,买一些专用的磁铁和柱子就可以了,而流式分选就需要分选型的流式细胞仪,都是几百万以上的。对操作员的要求来说,流式分选也要高一点,需要专门培训,需要注意的细节也要多很多。当然如果你周围有什么流式平台的话,磁珠分选和流式分选的成本应该是差不多的,流式分选一次大约1-2千(各地方不同),磁珠分选的柱子磁珠差不多也要烧这么多钱。

3、试剂不同。 这个最好理解,流式分选用的是荧光素偶联的抗体,磁珠分选用的是磁珠结合的抗体。

下面就要说下流式分选的优势了:

4、分选纯度。这个肯定是流式分选的纯度高,磁珠分选如果操作好的话也能达到80-90%的纯度,但流式分选一般都能达到90%以上(样本制备和仪器条件正常的条件下)。

5、多参数分选。流式细胞术很大的优势就是多参数,比如我可以分选CD4+CD25+CD127low的Treg,三色的一次就能分选。磁珠分选就必须先分CD4,再分CD25,更多参数的就没法进行。

6、低表达群细胞分选。比如有些干细胞它的表达比例只有百分之零点几,比例太少磁珠分选无法操作,流式就可以把这些细胞富集起来。

7、胞内荧光分选。流式分选在分子生物学中很大一部分应用就是分选GFP、YFP等阳性细胞,还有可以用Hoechst染精子的单倍体进行分选,这些针对胞内成分的分选也是磁珠分选无法实现的。

另外要说明的是,现在都很流行磁珠分选和流式分选相结合的方法,像上面举的例子分选CD4+CD25+CD127low的Treg,如果仅用流式分选可能时间太长,纯度也有影响。那么可以选择先用磁珠纯化出CD4阳性的细胞,再过流式分选CD4+CD25+CD127low的群体,这样既节省了时间保证了活性,也可以提高分选的纯度。

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