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因为dUTP替代dTTP是随机掺入到新合成的DNA链中的。那么在该过程中dUTP的用量大于dTTP对合成有利还是小于dTTP对扩增更好?dUTP用量等于dTTP对扩增的影响呢!
Dr_劉医生
用dU不会对dT有影响,在PCR产物或引物中用dU代替dT。这种dU化的PCR产物与UNG一起孵育,因UDG可裂解尿嘧啶碱基和糖磷酸骨架间的N-糖基键,可除去dU而阻止TaqDNA聚合酶的延伸,从而失去被再扩增的能力。UNG对不含dU的模板无任何影响。UNG可从单或双链DNA中消除尿嘧啶,而对RNA中的尿嘧啶和单一尿嘧啶分子则无任何作用。
Eason老歌迷
肯定不是越多越好啊!对于Taq酶催化的PCR反应,dUTP可以完全替代dTTP,也可以将 dUTP与其它dNTP等浓度添加到扩增体系中。但是对于等温扩增用的Bst DNA Polymerase,dUTP不可完全替换dNTP中的dTTP,至多替换50% dTTP,否则将会显著抑制该等温扩增反应。