椒盐皮皮虾穿铅衣
各位前辈,本人最近在做小鼠脾脏来源的Treg分选以及扩增。我利用研磨脾脏的办法获取淋巴细胞,制成单细胞悬液再进行磁珠分选。分选是应用的美天旎的小鼠Treg细胞分选磁珠。按照100-160万细胞/ml密度进行扩增培养。基础培养基为RPMI1640+10%FBS+1%双抗,同时添加:2mM L-谷氨酰胺、10mM HEPES 、50uM β-巯基乙醇、非必须氨基酸、100nM雷帕霉素。额外添加:鼠源IL-2 2000U/ml,Dynabeads™ 小鼠T 活化剂 CD3/CD28。反复进行了几次操作,但是细胞扩增效果不好,有的时候甚至看不到扩增,细胞状态就逐渐变差。不知道中间出现了哪些问题,在这里和各位老师请教一下,谢谢大家。
juyue2010
分选出的免疫细胞,初始接种密度非常关键,
huarenqiang5
建议培养48小时左右后再进行下一步操作。
毛利小五郎的徒弟
适当延长培养时间,感觉时间有点短。