Elispot检测新鲜PBMC IFN-γ分泌，使用CD3及PHA均无斑点分泌。

考虑体系内特异性产物有降解才会没有分泌斑点

您的实验结果显示在使用CD3和PHA刺激PBMC时未观察到IFN-γ分泌。这种情况可能是由于以下原因导致的：

新鲜PBMC质量问题：在新鲜PBMC不健康或不纯的情况下，可能无法观察到IFN-γ分泌。

PBMC培养条件问题：细胞培养基，温度和孵育时间等因素可能影响PBMC的分泌活性。

刺激剂质量问题：如果刺激剂质量低或不纯，可能无法观察到IFN-γ分泌。

细胞数量问题：如果细胞数量不足，可能导致IFN-γ分泌水平低。

技术问题：技术执行不当或仪器故障等因素也可能导致没有IFN-γ分泌。

建议您重新检查新鲜PBMC的质量，确认刺激剂质量，评估细胞培养条件，检查细胞数量和技术过程是否正确。