Elispot检测新鲜PBMC IFN-γ分泌，使用CD3及PHA均无斑点分泌。
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下图是今天检测的新鲜PBMC IFN-γ的实验结果图。
使用的是EDTA采集的健康人新鲜外周血，经密度梯度离心后获得PBMC并进行检测。
细胞培养基是1640+10%FBS
123列刺激剂是CD3，第四列是CMV多肽，第五列是5ug/ml的PHA。37℃，孵育20h。
理论上上述使用的阳性刺激剂均可刺激PBMC分泌斑点（之前做过）。
但这次不知道为什么一个斑点没有，求助！谢谢谢谢！
2 个回答
毛利小五郎的徒弟
考虑体系内特异性产物有降解才会没有分泌斑点
loveliufudan
您的实验结果显示在使用CD3和PHA刺激PBMC时未观察到IFN-γ分泌。这种情况可能是由于以下原因导致的：
新鲜PBMC质量问题：在新鲜PBMC不健康或不纯的情况下，可能无法观察到IFN-γ分泌。
PBMC培养条件问题：细胞培养基，温度和孵育时间等因素可能影响PBMC的分泌活性。
刺激剂质量问题：如果刺激剂质量低或不纯，可能无法观察到IFN-γ分泌。
细胞数量问题：如果细胞数量不足，可能导致IFN-γ分泌水平低。
技术问题：技术执行不当或仪器故障等因素也可能导致没有IFN-γ分泌。
建议您重新检查新鲜PBMC的质量，确认刺激剂质量，评估细胞培养条件，检查细胞数量和技术过程是否正确。
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