免疫荧光实验中间接标记会放大信号是什么原因？

间接检测方法通常有着更高水平的灵敏度，并产生更强烈的信号。信号经过间接方法放大，因为至少有两个标记的二抗与每个一抗结合。不过，二抗的使用需要额外的封闭步骤和对照。

数量上讲单个抗体由于结构的关系其抗体决定族或者互补位（paratope）只能结合单个抗体原决定基或者表位（epitope）。对于多克隆抗体来说虽然他们可以结合一个抗体的不同表位，相比之下，一个抗体却可以被多个其他抗体结合。免疫荧光分析，如果用带有荧光的单克隆做染色，那么一个抗原只能对应一个荧光.

1.使用荧光素偶联二抗进行染色，一个抗原表位结合一个单克隆一抗，但可以有多个二抗结合一抗，使得这个抗原表位实际上结合了更多的荧光素。

2.如果使用HRP偶联二抗则是基于酪胺的信号放大系统。利用HRP催化后续添加入体系的非活性荧光素，荧光素被活化后与临近蛋白的酪氨酸残基共价偶联，使得蛋白样品与荧光素稳定结合。

单个抗体由于结构的关系其抗体决定簇或者互补位（paratope）只能结合单个抗原决定基或者表位（epitope）。对于多克隆抗体来说，虽然它们可以结合一个抗原的不同表位，但每个表位对应还是只能结合一个抗体。相比之下，一个抗体却可以被多个其它抗体结合。具体到免疫荧光分析，试想如果是用带有荧光团的单克隆一抗做染色，那么一个抗原只能对应一个荧光团；如果使用带有荧光团的二抗做染色，虽然一个抗原只能结合一个单克隆一抗，但因为有多个二抗结合一抗，这个抗原最终会带有多个荧光团。这就是为什么间接标记的荧光强度会高于直接标记。