光谱流式数据怎么解析

可以用流式软件FCS Express 4, de Novo Software解析原始数据。

光谱解析算法可以分为两大类：监督和非监督算法。前一算法假设各个组分的参考光谱是已知的，在这种情况下，数据分析转变为一个超定方程组的解(只要通道的数量超过荧光染料的数量)，通常使用最小二乘法 (LSM, Least Square Method) 来解。

不能自动界定出阴性细胞群和阳性细胞群，用FLOWJO分析

操作步骤：

1.按照上面的步骤1,2,3操作之后，出现的情况如下：FlowJo没能自动界定出PE单染管的阴性细胞群和阳性细胞群。



1.1 单击选中工作台样本空间中PE单染管下的cw_Size节点，将其删除

1.2 右键单击补偿编辑器中的单染管出，点击“Clear”，将错误添加进去的单染管数据清除，如下图所示：



2.将错误界定的细胞群以及错误添加到补偿编辑器的数据清除之后，我们需要自己手动设门，界定出单染管的阴性细胞群和阳性细胞群，并手动将其添加到补偿编辑器。按以下步骤操作：

2.1 在工作台样本空间中双击PE单染管，在FSC/SSC点图中，界定出目标细胞群（淋巴细胞）



2.2 双击淋巴细胞群，打开图形窗口，X轴选择PhyEry::aCD8，Y轴选择Histogram ，选择区域门工具，界定出PE阳性和PE阴性细胞群，如下图所示：



备注：

a.设门的时候，选择区域门工具，阴性门和阳性门尽量设在细胞群分布的中心区域

b.如果单染管的直方图没有明显的双峰，在设门的时候，阴性门和阳性门之间的距离应尽可能远一些

2.3 将工作台样本空间的“PE-”节点拖到补偿编辑器里PE单染管的阴性孔，“PE+”节点拖到阳性孔里



3.当所有单染管的数据都被添加到补偿编辑器后，FlowJo自动计算出补偿矩阵。在工作台组空间中选择3-color comp组，然后到补偿编辑器的菜单栏中选择“补偿 > 添加到组”，对该组的所有样本进行荧光补偿。