做间接法荧光免疫染色，如何设置对照？

(1)空白对照：如果你做的是石蜡切片免疫组化，这个对照必须有，目的是看自发荧光，脱蜡后直接在荧光显微镜下观察。
(2)阴性对照：标本直接滴加二抗，呈阴性反应。
(3)抗原对照：标本加同种动物的未免疫血清，以PBS冲洗后，在加抗免疫球蛋白荧光抗体。因未免疫动物的血清中无特异性抗体，应呈阴性反应。

（1）自发荧光对照：标本只加PBS或缓冲甘油封片，荧光显微镜观察组织内如果有荧光，称为自发荧光。

（2）荧光抗体对照：标本只加间接荧光抗体染色，结果阴性。

（3抑制试验：可分为一步方法和二步方法。

一步抑制方法：先将荧光抗体与过量未标记特异性抗体作等量混合，再加在标本上染色，结果应为阴性。

二步抑制方法：标本先加未标记的特异性抗体，水洗后再加标记荧光抗体，结果应呈阴性或明显减弱的荧光。

（4）阳性对照

用已知阳性标本做直接法免疫荧光组织化学染色，结果应呈阳性荧光。如对照1和2无荧光或弱荧光，3待检查标本呈强荧光即为特异性阳性荧光。

结果：如对照（1）、（2）、（3）均呈阴性，阳性对照和待检标本呈阳性荧光则为特异性荧光。

一般设置完全不染色对照（或者只染一抗对照），及使用一抗相同igg的isotype+二抗对照

要设置两个对照：1.只加一抗，不加二抗的对照。2只加二抗不加一抗的对照。