在ELISPOT结果中出现不规则的大块斑点，有的区域没有斑点是什么原因？

一方面可能不是单细胞悬液，细胞没有铺匀，另一方面可能是洗的不干净

培养期间不要移动 plate，并且采取措施防止蒸发，可以使用铝箔纸包裹 plate。细胞去除不完全会破坏 spot 的形成。HRP 结合物（HRP-conjugates）不能在含有叠氮化钠的 buffer 中使用，因为叠氮化钠会抑制酶的活性。残留的底物会引起孔中的色斑。

加样时没有充分混匀导致样品不均匀或者被污染。

产生大的斑块是细胞分离不完全导致的，细胞分离尽可能使用单抗，并确保细胞是单细胞悬液，避免细胞团块，若有团块可用细胞筛过滤

一般这种情况主要考虑是细胞没铺匀，目的细胞都聚集到了一片区域；如果不是此问题就要考虑是否是污染了

大斑块？是很多阳性点的斑块聚集？是不是铺板的时候，将细胞晃动了～细胞聚集在一起了？如果不是阳性斑点的聚集～有空斑的话～可以考虑一下是不是细胞数量铺太多了～细胞数太多容易出现空斑

大斑点考虑没洗干净。再就是考虑样本污染。