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ELISPOT

实验分类:

免疫学实验

最新修订时间:

简介

随着酶联免疫分析技术在医学及生物学领域的广泛应用,使体外检测各种细胞因子及抗体研究有了新的突破。在研究免疫应答机制时以往常用用酶联免疫吸附法(ELISA)检测体液中游离的细胞因子(CK)或抗体,但由于游离的循环抗体或CK的半哀期不同,使之在体液中不断的被代谢或与靶器官结合,而不能确切的反映体内的抗体及CK的水平。80年代,国外的科研工作者根据ELISA技术的基本原理,建立了体外检测特异性抗体分泌细胞和CK分泌细胞的固相酶联免疫斑点技术(ELISPOT)。

来源:丁香实验

操作方法

ELISPOT实验

1. PBS 溶解抗原为30 μg/ml,加100 μl/孔于PVDF 膜铺底的96 孔灭菌板过夜; 2. 第二天吸去包被液后,加5%FCS 的PRMI 1640 培养基100 μl 封闭1 小时,37℃; 3. 准备脾细胞悬液(用氯化铵去除红细胞,制备成单个脾淋巴细胞悬液); 4. 从1 × 106/孔开始,按1:3 的稀释度开始逐孔稀释做不同浓度梯度,并做3

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