ELISPOT的优势
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ELISPOT的优势
ELISPOT斑点酶联免疫分析使细胞 因子分泌过程更加形象。因为细胞 因子围绕在细胞 周围,在被上清液稀释之前,会和邻近细胞 表面的受体结合,或者降解。细胞 因子和GranzemyB ELISPOT实验是最有效的体外监控CD4或CD8T细胞 抗原的方法。通过测定单个细胞 因子信号及其频率,可以建立具有不同集落大小的特殊T细胞 库。
ELISPOT实验检测细胞 因子的独特优势
☆从1到10,000,000,可以精确测量体外细胞 因子的分泌频率,和ELISA 以及四聚体染色、细胞 内细胞 因子染色相比,具有灵敏度高、特异性好的特点。提高灵敏度非常关键,因为体内产生抗原特异性T细胞 的频率非常低。
☆大批量细胞 分析:可以分析上百个样品,检测多种抗原。
☆所需细胞 浓度低。和其他试验方法相比,ELISPOT方法对细胞 浓度没有太高的要求,比如,检测600中不同的抗原或肽段只需要45ml血。
☆可以确定CD4或者CD8抗原决定簇。因为实验所需细胞 量少,实验灵敏,所有ELISPOT对于决定簇图谱的绘制,肽段文库的筛选是最理想的选择。
☆可以建立抗原特异性T细胞 亲和函数
☆可以研究未经药物处理过的T细胞 的实际细胞 因子分泌过程,T细胞 分泌物下降,则说明T细胞 产量减低或者单个细胞 分泌功能下降。
☆ELISPOT不破坏淋巴细胞 活性,可以继续进行细胞 克隆以及低温储藏研究
☆低温存藏的人淋巴细胞 可以继续保持生物学活性,可以重复实验步骤。
ELISPOT是现今研究T细胞 功能,进行T细胞 诊断最有力的工具,ELISPOT的研究已经成为一门科学。
ELISPOT分析仪专利草案
在病理学教授Paul V. Lehmann博士带领下,众多学者共同在CWRU大学通过了新一代ELISPOT分析仪的专利认证。 最初ELISPOT是为了检测B细胞 分泌抗体而问世的,因为T细胞 分泌细胞 因子而B细胞 产生抗体,新一代的ELISPOT增加了检测T细胞 分泌细胞 因子的功能。
ELISPOT分析具有精确性、客观性,可重复性以及自动化特点,改变了以往ELISA 的耗时,结果不客观的缺点。
ELISPOT分析仪的出现解决了以下问题
☆哪些斑点是抗原特异性T细胞 产生的(此斑点具有进一步分析价值),哪些是无关细胞 产生的(此斑点没有T细胞 研究价值)
☆斑点大小的意义
☆在对不同细胞 因子计数和分析时,如何定义斑点最大和最小尺寸
☆如何从单个细胞 基础上分析
☆实验精确度有多高?如果一个细胞 产生相似的细胞 因子,在多大程度上会干扰分析结果?
☆几次重复实验才能使结果更有意义?
ELISPOT:世界一流科学家辛勤劳动的果实
ELISPOT分析仪的最初研究在CWEU大学开始,由26名工作人员,15个科研工作者,和许多来自BD、Pharmingen的科学工作者共同努力下研制成功的,为此CTL也成为美国国立卫生院免疫耐受网络(ITN)指定的参考实验室,专门对各种ELISPOT临床试验结果进行测试。
经科学认证的ELISPOT分析仪包括三个分析模式,适用于客户不同的消费水平、研究目的、外围设备,附属软件和数据处理方法。另外,CTL提供图像分析服务,ELISPOT有自己的网上实验室,可以提供网络培训以及为临床试验项目按照合同约定提供研究服务。
EILISPOT:科学革命
自从CTL发起ELISPOT革命以来,很多人在借鉴我们的成功经验。作为创始人,CTL致力于开创ELISPOT新方法并将其提高到科学的高度
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