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科研学霸天团，48小时有问必答

问肝脏油红O的染色步骤

府宅

1. 油红O染色液的配制油红O染色液分储备液和工作液。①油红O储备液的配方：100%异丙醇100 mL+0.5 g油红O干粉，充分溶解，过滤，4度避光保存。②油红O工作液的配方：实验前，将储备液与蒸馏水按3:2稀释，过滤（滤纸或极性滤膜配1mL注射器），酒红色且无沉淀。现配现用原则，避免工作液出现沉淀。2. 60%异丙醇的配制60%异丙醇的配方：100%异丙醇60 mL+蒸馏水40 mL，4度保存

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问western blot 转膜及条带问题

dxy_gwrp7ndq

1.洗膜不充分，增加洗涤液的体积和洗涤次数；在洗涤液中加入Tween=20。2.二抗浓度过高，引起了一些非专一性的抗原-抗体相互作用，适当降低二抗浓度，可以分梯度进行。3.二抗的识别抗原免疫簇不唯一，这是因为二抗是多克隆抗体，使用单克隆抗体的二抗，此时二抗的识别抗原免疫簇是唯一的，其非专一性的抗原-抗体相互作用会大为减少。当然，有时，单克隆抗体也会有识别抗原免疫簇不唯一，如果两种蛋白质的抗原免疫簇

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问怎么避免抗癌药物对自身造成伤害？

府宅

严格控制抗癌药的用量，可以预防性使用保护性药物，如护肝、护肾的药物

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问免疫组化染色为什么有杂点？

府宅

组织中非抗原抗体反应出现的阳性染色称为非特异性背景染色，最常见的原因是蛋白吸附于高电荷的胶元和结缔组织成分上。最有效方法是在用第一抗体前加制备第二抗体动物之非免疫血清(1:5~1:20) 封闭组织上带电荷基团而除去与第一抗体非特异性结合。必要时可加入 2%~5% 牛血清蛋白，可进一步减少非特异性染色。作用时间为 10~20min。

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问染色最重要的操作步骤是哪个

bigred大红

样本前期处理和敷抗体都是关键步骤。

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问如何减少免疫组化的非特异性染色

府宅

(1)可以选择购买高质量、高纯度的荧光素二抗。（2)延长血清封闭时间。(3)调整一抗和二抗孵育条件和浓度至。(4)一抗和二抗孵育后的清洗不充分。增加清洗次数和延长清洗时间。

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问免疫组化实验中购买的抗体试剂建议浓度在预实验中效果不好，如何调整浓度能节省抗体和实验周期

dxy_gwrp7ndq

为调整到最佳浓度，可进行预实验，通过滴定测试确定适合自身应用的最佳抗体工作浓度

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问即用型免疫组化怎么具体操作

泌尿神兽

1、脱蜡和水化：脱蜡前应将组织芯片在室温中放置 60 分钟或 60℃恒温箱中烘烤 20 分钟。 a 组织芯片置于二甲苯中浸泡 10 分钟,更换二甲苯后在浸泡 10 分钟 b 无水乙醇中浸泡五分钟 c 95%乙醇中浸泡五分钟 d 75%乙醇中浸泡五分钟 2、抗原修复：用于福尔马林固定的石蜡包埋组织芯片： A 抗原热修复 a 高压热修复在沸水中加入 0.01m 枸橼酸钠缓冲溶液（ph6.0）.盖上

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问做小鼠脾脏的胞内因子分析时，应该用什么刺激阻断剂，适合与IL-6和IL-1β的检测？

府宅

可通过收获3天巯基乙酸盐诱发的腹膜细胞，并用1μg/ ml LPS和GolgiPlugTM刺激4小时

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问请问做肿瘤的免疫组化实验，需要阳性、阴性对照吗？

小布丁瑶瑶

免疫组化阴性对照一般是需要做的，但是也不是每一种检查都需要做阴性对照的，如果检查不常用的抗体就需要做阴性的对照，如果是常用的抗体就不需要做阴性对照了，只需要做阳性对照就可以了。

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问爬山细胞怎么做免疫组化，HE染色技术，详细步骤，谢谢师兄师姐。

dxy_gwrp7ndq

HE染色：（1）先将长有细胞的六孔板用PBS洗3次（2）将六孔板浸入95％的酒精固定15分钟（3）PBS洗2次，每次1分钟（4）浸入苏木素染液，染色5分钟（5）自来水浸洗（6）浸入稀盐酸酒精进行分色，数秒即可（7）自来水浸洗（8）浸入淡氨水中，使胞核蓝化，3分钟（9）自来水浸洗（10）浸入伊红染液，染色6分钟（11）自来水浸洗（12）依次经过70％、80％、90％酒精各1次，95％酒精2次和100

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问请问Elisa的试剂为什么必须先在室温平衡，目的和原理是什么

yfcwyh

在临床实验室，对试剂准备一般不太注意，通常的做法是，在实验时将试剂从冰箱中拿出来即用，而忽略了这种做法有可能影响后面温育时间不够的问题，其直接的后果是对一些弱阳性标本的检测出现假阴性。因此在ELISA试剂盒测定中试剂的准备zui为关键的是，在实验开始前，将试剂盒先从冰箱中拿出来，在室温下放置20分钟以上后，再进行测定，这样做的目的，主要是为了在后面的温育反应步骤中，能使反应微孔内的温度能较快地

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问请问用CD24-FITC CD44-APC标记肿瘤干细胞用流式检测的时候群体会移动是怎么回事啊，同一个样品先后两次上样群体

Timy最爱柠檬水

如果一批细胞需要重复多次流式检测，最好使用多聚甲醛进行固定，这样才能排除细胞因离体后出现再分化的情况。与此同时，应该在再次检测的时候重新调整电压。

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问免疫组化过程中要注意哪些问题？如何确定抗体的滴度？

小暮

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问流式细胞术巨噬细胞分析

txs900416

一般巨噬细胞流式需要封闭，封闭得好的话是只有一群的，固有层巨噬细胞应该是f4/80阳性，建议楼主封闭完全+染cd11b，可看到双阳的就是巨噬细胞。如果出现中表达和高表达，建议在确定没有非特异性染色的情况下，两群都圈进去

1 回答672 围观

问请问用断颈法处死符合伦理吗？按这种方法做实验投稿会有影响吗？

txs900416

符合伦理，但要在中度麻醉下进行断颈，不能直接断颈，伦理过不了

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问在免疫组织化学的染色过程中，脱片产生的原因和如何防止脱片？

郭郭的郭郭

1.多聚赖氨酸玻片质量的问题。我原先是买的，后面补做第二批时用的病理科老师自己做的片子，要好一点。2.组织切的不好，切片机的问题例如比较老的旧的机器切得厚或者不均匀，或者切片者手法不好等。3.组织的问题，我用的组织癌症的很多，越是癌症组织有坏死之类越容易脱。4.没烤好，时间短温度不够之类。

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问在免疫组织化学的染色过程中，常用试剂的配制和使用？

dxywode

先以少量0.05mol/L(pH7.6)的TB 溶解DAB，然后加入余量TB，充分摇匀，使DAB 终浓度为0.05%,过滤后显色前加入30%的H2O230～40μl，使其终浓度为 0.01%。

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问 PBS 的 pH 和离子强度的使用和要求？

LLLLDL

中性及弱硷性条件(PH7-8)有利于免疫复合物的形成，而酸性条件则有利于分解;低离子强度有利于免疫复合物的形成，而高离子强度则有利于分解。

3 回答105 围观

问放射免疫测定时，胰岛素释放试验的曲线特点？

LLLLDL

（1）胰岛素分泌不足型：为试验曲线呈低水平状态，表示胰岛功能衰竭或遭到严重破坏，说明胰岛素分泌绝对不足，见于胰岛素依赖型糖尿病，需终身胰岛素治疗。（2）胰岛素分泌增多型：患者空腹胰岛素水平正常或高于正常，刺激后曲线上升迟缓，高峰在2小时或3小时，多数在2小时达到高峰，其峰值明显高于正常值，提示胰岛素分泌相对不足，多见于非胰岛素依赖型肥胖者。该型患者经严格控制饮食、增加运动、减轻体重或服用降血糖药物

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