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科研学霸天团，48小时有问必答

问有用cst的p62抗体跑出来条带的大神吗

bamboopiggy

我用过，cst的p62 很好用啊，我是300mA，转了2小时。

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问Perforin

Marchers

可以用流式做胞内染色，第一步要固定细胞，一般采用多聚甲醛，使细胞固定在一定的形状，即使细胞膜破裂细胞也能保持在这个形状而不发生碎裂：第二步，需要用打孔剂在细胞膜上打孔，同时加入荧光素偶联抗体，使抗体能够通过细胞膜上人为的小孔进入细胞内部与细胞因子结合。在此之前需利用高尔基体阻断剂（brefeldinA,BFA）阻断细胞因子的分泌，而不影响细胞因子的合成，让细胞内细胞因子的含量达到流式检测的标准。具

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问养的H358细胞表面有很多白色的小球，请问这是有污染吗？

bamboopiggy

H358 是人肺癌细胞系。你先看看你这个小白球是只在有细胞的地方有，还是所有地方都有，如果是只在有细胞的地方有，可能是因为营养问题，细胞的状态不好。如果是全都有，可能就是污染了。

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问请问有人做snu387？transwell 24孔板，上室加多少细胞呢？

bamboopiggy

snu387 是肝癌细胞系，有文献说是放了5x10^4, 参考文献题目：ARK5 promotes invasion and migration in hepatocellular carcinoma cells by regulating epithelial‑mesenchymal transition

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问染色体玻片老化过度、怎么补救

秋秋欣欣

可以提高荧光信号，变形较轻的应该还可以出

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问心脏蠕动机灌注

小小小小小芳

如实验室没有专用的灌注系统，就用医院的普通的输液器即可，小鼠最好用儿童用输液器，剪开胸廓后要先剪开右心耳放血，然后直接在心尖处（针的长轴与心脏长轴基本一致）插入灌注针，开始不熟练可在升主动脉处看到灌注针（为了防止损伤心脏和血管，可将针尖磨钝），另外肝脏很快变色也是指证之一。灌注先用生理盐水冲洗，不一定要加肝素抗凝，只要熟练后灌注效果差不多。以肝脏颜色变白为止，改灌PFA。灌注时水位差不宜太高，约8

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问（求助）细胞消化使用的胰蛋白酶是否可以用于抗原修复

申东熙老伯

最好不要，胰酶消化能力比较强，抗原修复也可以用柠檬酸钠。

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问求助求助

Marchers

这个检索关键词查文章就行．小白先看中文了解概述，再去找英文。近年的学位论文方法学部分更细致，供参考：王志盛. 黄连素对耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌外排泵MexAB-OprM的作用研究.2020.河南中医学大学，MA thesis.

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问免疫组化透膜问题

bamboopiggy

加入tritonx100以后，一定要覆盖所有的组织，否则会出现透膜不匀的现象。

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问有人遇到过同一个东西刺激之后IL-6和TNF-α的表达相反嘛

Marchers

会有，白介素-6（IL-6）不仅参与炎性反应，而是补体途径也会影响表达；而TNF-α作为肿瘤坏死因子，除外炎性反应外，细胞坏死和肿瘤性凋亡也会影响表达

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问肠道菌群问题

Topmicro

最好是在屏障区做，具体看你实验的设计，你要考察的指标。

6 回答154 围观

问几组简单的微生物涂片

Marchers

革氏染色，铜绿和肺炎链球菌都是的G-，马拉色菌G+

4 回答100 围观

问巨噬细胞既表达CD206又表达inos是啥啊

Marchers

两个不是一种，CD206是M2型巨噬细胞极化后高表达的共刺激分子，同理M1型则是CD80等；inos是诱导型一氧化氮合酶，是M1型巨噬细胞极化后高表达的中间产物，会促进炎性因子和趋化因子的大量释放。下面个图非常详细的总结了各类巨噬细胞的免疫功能；

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问骨髓来源巨噬细胞极化

汤姆卜丽波

骨髓来源的未分化比较好诱导啊。

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问细胞免疫荧光疑问，贴壁细胞

dxy_n4jex0k8

是不是铺板太密了？我用的hek293t它可能会长几层，dapi染了上面的那层，但是荧光看见的是下面的，结果它俩就不重合。找靠边一点的视野，最好是单层细胞，会好一些。而且红色荧光本来就难拍一点。如果是悬浮细胞本回答可能不具备参考价值。

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问石蜡切片昆虫组织如何固定在载玻片上？

Eason老歌迷

你可以看看这篇文献‘’石蜡切片常见的脱落原因及预防 ‘’，讲的挺好的。如果很容易脱离，可能是脱水、通明缺乏,致使白腊不能浸入牵强切出的片子,脱蜡时缩短,入水或染色后又膨胀,因而易掉落。也可能是脱水、通明过度,浸蜡时间过长或温度太高,引起安排缩短硬脆,导致切片不完好,染色时导致掉落。

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问细胞免疫荧光抗体稀释计算，求大神

Eason老歌迷

细胞免疫荧光抗体的稀释计算，你有货号，你可以去官网查一下有些推荐的稀释比例，以比例形式写出，如1:1000；有些以浓度形式写出，如1μg/ml，然后呢你买回来的抗体它小管上有多少ug，就直接按照比例稀释就行了，比如说这个就1：400-1:600稀释就行。

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问各位老师，请问如何在96孔板中培养生物膜，现在做的一洗就冲掉了，救救孩子吧~

dxyc42u

生物膜形成而大部分又脱落是很正常的现象，一般脱落后第二次或第三次重新形成后才算是挂膜成功，也就是说第一次生物膜形成不能算挂膜成功，如果第一次挂膜后没大量脱落是偶然的，经一、二次脱落后才形成才是必然的。这样说可能太绝对，但大多数情况下是这样的。

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问求助去除肝组织代谢提取物中的甲醇

丁香一方

1.通过蒸馏，将甲醇提取，必要时调整气压蒸馏。2.归根结底是要冻干粉末，可以加入溶液稀释甲醇浓度，调节冰点。3.通过调整气压，来调节肝组织代谢提取物的冰点。

3 回答96 围观

问神经细胞(ht22）二抗稀释比例应该是多少合适？

LuoYinli07

1：3000差不多，我一般选择推荐稀释比例的中间值进行稀释。

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