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胶回收的产物低,浓度不足以做连接时怎么办?

相关实验:DNA 核酸浓度的测定实验

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高山云初

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6 个回答

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平淡EB8V

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二次PCR或者直接连,现在重组酶效率很高,只要有产物就可以连上

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有帮助

1、把切的两块或多块胶融化后,无论多大的体积都用一个管子,转移到同一个柱子上。

2 、溶胶时所加的溶液可多一点,这样更有利于DNA与膜的结合,不过一般不要多余750ul。


3、 胶回收的关键是通过柱子的溶液的盐浓度、酸碱性(电荷)和疏水性使DNA与柱子结合,因此,若电泳缓冲液的PH偏高,可在溶胶液中加入10ul(PH 5.0,3mol/L的 NaAC);为了使DNA分子更好的拦截在膜上,可以添加30%异丙醇在加热溶解胶后的液体里。

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sswei

有帮助

提高胶回收量的办法:

1、 增加电泳时的上样量。

2、电泳缓冲液用新鲜配制的。

3、切胶时尽量只切有条带的胶,减小切胶体积:含目的片断很少的胶就不要要了,不然影响回收率。

4、把切的两块或多块胶融化后,无论多大的体积都用一个管子,转移到同一个柱子上。

5、 溶胶时所加的溶液可多一点,这样更有利于DNA与膜的结合,不过一般不要多余750ul。

6、 胶回收的关键是通过柱子的溶液的盐浓度、酸碱性(电荷)和疏水性使DNA与柱子结合,因此,若电泳缓冲液的PH偏高,可在溶胶液中加入10ul(PH 5.0,3mol/L的 NaAC);为了使DNA分子更好的拦截在膜上,可以添加30%异丙醇在加热溶解胶后的液体里。

7、 加洗脱液之前,将柱子在室温放置几分钟(大约需10分钟),以使乙醇充分挥发。

8、最后少加些洗脱液,尽量减少回收体积,一般用30-50μl洗脱液洗脱(不能太少,否则无法浸湿膜反而不利于洗脱);洗脱液滴在膜中央,以充分洗脱结合在膜上的DNA。

9、 可以在加入洗脱液之后,可以在55度水浴5分钟或放在50度水浴10分钟以上再洗脱,或用封口膜密封4度过夜,第二天再离心回收,效果不错。

10、将离心后的洗脱液加回吸附柱,再次离心。

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开水白菜zjl

有帮助
  1. 可以利用该胶回收的产物再次进行PCR扩增,以获得高浓度的目的DNA
  2. 其次可以增大电泳时点样的体积,以提升胶回收的产物浓度
  3. 如果浓度过低,也可尝试降低载体的量,使胶回收产物和载体的摩尔比在10:1~1:1之间
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粥辰辰辰辰

有帮助

1、 增加电泳时的上样量。

2、电泳缓冲液用新鲜配制的。

3、切胶时尽量只切有条带的胶,减小切胶体积:含目的片断很少的胶就不要要了,不然影响回收率。想了解更多精彩内容,快来关注ELISA检测试剂盒抚生

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huarenqiang5

有帮助

建议适当增加循环数来提高目的条带的浓度,或者适当延长在柱子上停留的时间或减少切胶体积等试试看。

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