离心柱法提取DNA， 得率低？

我用过离心柱法，得率还挺高的。

1 ) 样品材料老化或者反复冻融导致 DNA 含量下降：

应选择新鲜的材料样品，如新鲜血液、新鲜菌液、刚离体的动物组织或幼嫩的植物组织等，不能立即处理的样品应放入液氮或-70℃低温保存，以免DNA降解。

2 ) 样品破壁或者裂解不完全， DNA 未充分释放：

动植物样品应在液氮中充分研磨，G+细菌、酵母等破壁较困难的样品应用溶菌酶、Lyticase酶或机械方法协助破壁。

3 ) 样品过多导致细胞裂解不充分：

加样过多导致细胞裂解不充分，细胞裂解不充分。

4 ) DNA 吸附不均匀：

如，在上吸附柱前没有加无水乙醇，或使用低浓度乙醇代替无水乙醇，会导致DNA不能充分沉淀，与硅胶模吸附不彻底，因此应在样品裂解后加适量的无水乙醇，再上吸附柱使DNA与硅胶模充分吸附。

5 ) DNA 洗脱不适当：

洗脱缓冲液pH过低会阻碍DNA从硅胶模上洗脱下来，应确保洗脱液pH值在7.0～8.5之间。洗脱液体积过少(<30μL)，不易浸透硅胶模，使DNA不能洗脱下来，因此，洗脱液体积应大于30μL，超过200μL，所得的DNA 浓度降低。洗脱时可以将洗脱液于65～70℃水浴预热，加入洗脱液后在室温静置2～5分钟，可提高洗脱效率，加大DNA 产量。

离心柱法提取DNA时发现得率较低，可能是由以下几个原因导致的：

1. 样本质量：样本中DNA的含量和完整性直接影响提取效率。样本中DNA含量过低或降解严重可能导致得率低。确保选择新鲜、高质量的样本，并采取适当的储存和处理方法以保持DNA的完整性。

2. 试剂质量：使用高质量的DNA提取试剂盒可以提高提取效率。确保使用可靠的试剂，并遵循试剂盒说明书中的操作步骤。

3. 操作步骤：正确的操作步骤对于获得高效DNA提取至关重要。确保遵循试剂盒说明书中的操作步骤，避免操作失误。

4. 洗涤步骤：离心柱法中，洗涤步骤是关键步骤之一。确保使用无DNA酶的洗涤缓冲液，避免洗涤过程中DNA的损失。

5. 洗脱体积：洗脱体积对于DNA得率和纯度至关重要。确保选择合适的洗脱体积，以最大限度地保留DNA。

6. 洗脱效率：确保洗脱液充分接触离心柱中的硅胶膜，以实现高效的DNA洗脱。可以在洗脱时轻轻敲打离心柱，帮助DNA从硅胶膜上解离。

7. 避免RNA干扰：RNA可能与DNA结合，影响DNA的提取和纯度。在提取DNA之前，可以使用RNase A处理样本，以去除RNA。

主要考虑是菌体量可能过大,裂解不充分,或裂解液与中和液比例不适当等原因导致。

按照说明书提取浓度有点低，但是纯度很好

1. 原因可能是材料多糖多酚等丰富的次生代谢，将会严重的影响DNA得率
2. 材料多过或过少，一般0.1 g~0.5g
3. 溶解DNA时可将温度提升至60度，并延长时间，以获得高得率的DNA