原理
Hb被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋白(Hi)，再与氰离子(CN)结合，生成稳定的氰化高铁血红蛋白(HiCN)。HiCN最大吸收峰在540 nm处，在特定条件下毫摩尔吸光系数为44 000(mmol·cm)，根据吸光度即可求出血红蛋白浓度(g／L)。
材料与仪器
血液样品
Prabkin试剂 文齐试剂 马其改良试剂 HiCN转化液
分光光度计 注射器
Prabkin试剂 文齐试剂 马其改良试剂 HiCN转化液
分光光度计 注射器
步骤
一、实验、试剂：
l、都氏（Prabkin）试剂
碳酸氢钠1.0g，氰化钾0.05g铁氰化钾0.20g
蒸馏水1000mL该试剂PH值达8.5与血红蛋白作用较慢，故试剂与血混合后一般放置20min才能比色，此试剂易发生混浊，近年来己不采用．2、文齐（Van KamPen和zilstra）试剂
氰化钾0.05g铁氰化钾0.2g非离子表面活性剂0.5－lml，磷酸二氢钾0.14g蒸馏水1000mL，纠正PH值至7.0-7.4．3、马其（Matsabara）改良试剂在文齐试剂内加NaCl5.0g或50g（常用改良试剂）（加强改良试剂）常用改良试剂可稍除由异常球蛋白所引起的混浊，加强改良试剂可消除由白细胞显著增加所引起的混浊．
二、实验操作方法：
l、取指血或V血20ul，加到5mL血红蛋白转化液中，混匀，静止5分钟，2、用分光光度计比色，波长540nm，以蒸馏水或空白转化液调零，测定吸光度。
3、如果使用符合WHO标推的分光光度计，则可根据测定吸光度 A 直接计算出红蛋白的浓度，Hb(g/L)=（Aλ540/44）x（64458/1000）x251=Ax367.7，其中 Aλ540／HicN为测定管吸光度。64458为 Hb分子量，64458/l000为10mmoL／LHb 溶液中含Hb克数，251为血液稀释倍数，Hb曲线求R值，定值，50g／L 100g／L 150g／L和 200g／LHicN考液在 721型分光光度计上固定吸光度 A 分别为 0.13，0.27，0.405，0.54
l、都氏（Prabkin）试剂
碳酸氢钠1.0g，氰化钾0.05g铁氰化钾0.20g
蒸馏水1000mL该试剂PH值达8.5与血红蛋白作用较慢，故试剂与血混合后一般放置20min才能比色，此试剂易发生混浊，近年来己不采用．2、文齐（Van KamPen和zilstra）试剂
氰化钾0.05g铁氰化钾0.2g非离子表面活性剂0.5－lml，磷酸二氢钾0.14g蒸馏水1000mL，纠正PH值至7.0-7.4．3、马其（Matsabara）改良试剂在文齐试剂内加NaCl5.0g或50g（常用改良试剂）（加强改良试剂）常用改良试剂可稍除由异常球蛋白所引起的混浊，加强改良试剂可消除由白细胞显著增加所引起的混浊．
二、实验操作方法：
l、取指血或V血20ul，加到5mL血红蛋白转化液中，混匀，静止5分钟，2、用分光光度计比色，波长540nm，以蒸馏水或空白转化液调零，测定吸光度。
3、如果使用符合WHO标推的分光光度计，则可根据测定吸光度 A 直接计算出红蛋白的浓度，Hb(g/L)=（Aλ540/44）x（64458/1000）x251=Ax367.7，其中 Aλ540／HicN为测定管吸光度。64458为 Hb分子量，64458/l000为10mmoL／LHb 溶液中含Hb克数，251为血液稀释倍数，Hb曲线求R值，定值，50g／L 100g／L 150g／L和 200g／LHicN考液在 721型分光光度计上固定吸光度 A 分别为 0.13，0.27，0.405，0.54
氰化高铁血红蛋白标准曲线或按下式求出吸光度血红蛋白换算常数（Ｋ值）K=qHb(g/L)qA=(50+100+150+200)/(0.13+0.27+0.405+0.54)=371.75五、计算：血红蛋白（g／L）＝测定管吸光度x367.7参考值：成年男性：120-160g／L
成年女性：110－150g／L
初生儿： 170－220g／L
注意事项
本法试剂中KCN有剧毒，测定过程中高白细胞和高球蛋白血症易致混浊，HbCO转化较慢。
常见问题
来源《检验操作技术与林川应用简明手册》、《检验医学与临床》。
来源：丁香实验
