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质粒转染遇到的几个问题

相关实验:质粒转化大肠杆菌

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科研饼干

最近在学着构质粒,遇到几个问题想问一下各位大佬

1.构建慢病毒稳转质粒能不能拿来做瞬转

2.为什么找公司构建了sh的稳转拿来做了瞬转预实验以后wb和pcr都没有显示敲低成功

3.质粒构建过程中的点突变或移码突变问题怎么解决。

感谢各位大佬的帮助

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3 个回答

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bamboopiggy

有帮助

1.慢病毒的质粒不能作瞬转,因为包慢病毒还需要几个包装质粒。

2,原因同1.

3,扔掉,重新作,一般作慢病毒的shRNA的序列都是公司直接合成的,除非是合成有问题,否则不会出现突变。

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Eason老歌迷

有帮助

慢病毒质粒做瞬转应该可以的,我见过先用一个慢病毒做好稳转细胞系,再用另一个慢病毒继续转染做稳转细胞系,即这个细胞里经历了两次病毒感染,是血液专业的悬浮细胞系。

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balalaLy

有帮助

稳转质粒可以做瞬转,瞬转后敲低效果低应该是转染不成功。或者是质粒不行,需要重新设计引物构建shRNA。

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