二维电泳为什么可以将不同种类的蛋白质进行高分辨率的分离？

在等电聚焦阶段，蛋白质首先按照它们的等电点（pI）进行分离。等电点是指蛋白质电荷为零的状态。不同种类的蛋白质具有不同的pI值，因此可以通过调整pH梯度使得蛋白质在电场中的迁移位置达到各自的等电点，进而实现分离。

在IEF阶段之后，蛋白质进一步按照分子质量进行分离。在这一阶段，蛋白质与SDS（十二烷基硫酸钠）结合，使得蛋白质带上负电荷，并按照分子质量的大小进行分离。SDS-PAGE利用聚丙烯酰胺凝胶进行电泳，凝胶的分子质量排阻作用使得蛋白质按照分子质量的大小从凝胶中逐渐渗透出来。

通过这两个阶段的分离，二维电泳可以将不同种类的蛋白质按照等电点和分子质量进行高分辨率的分离。

二维凝胶电泳又称双向电泳（2-DE），通过等电点和相对分子质量两个维度对复杂、混合蛋白质样品进行分离，由等电聚焦电泳（IEF）和SDS-聚丙烯凝胶电泳组成。先通过等电聚焦电泳使蛋白质按等电点进行分离，再利用SDS-PAGE在垂直方向进行基于相对分子质量的二次分离，最后得到二维分布的蛋白质电泳图。

按照pI分离），然后再进行SDS-PAGE（按照分子大小），经染色得到的电泳图是个二维分布的蛋白质图。

2D PAGE实际上是两种不同分离类型的组合。在第一种情况下，等电聚焦电泳（IEF）根据等电点分解蛋白质；在第二种情况下，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳进一步分解聚焦蛋白质（如图1）。因此，2D PAGE通过等电点和分子量分别在第一维和第二维分解蛋白质。