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elisa试剂盒的专一性如何验证?

相关实验:ELISA 实验

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dxy_0f1uunu0

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5 个回答

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土井挞克树

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专一性主要靠标准曲线来验证,拿到试剂盒首先做标曲,标曲好基本上试剂盒就没问题

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高山云初

有帮助

试剂盒的专一性主要包括两个方面:交叉反应和干扰物质。交叉反应指试剂盒检测到与目标分子结构相似的其他分子,从而导致误判或偏差。为了验证试剂盒的交叉反应情况,可以使用已知含有该分子的样品进行测试,并观察是否会出现阴性假阳性等情况。如果出现交叉反应,还需要进一步进行分析鉴别。

  干扰物质是指影响试剂盒检测结果的其他分子或因素,例如酶、基质等。为了避免干扰物质对试剂盒结果的影响,需要进行一系列控制实验。其中包括:空白对照(不添加样品),阴性对照(添加不含目标分子的样品),阳性对照(添加已知含有目标分子的样品),以及样品预处理等步骤。

  此外还需注意以下几点:

  1.样品的来源和处理方法可能会影响试剂盒的专一性,因此必须在操作前对样品进行充分的处理和准备。

  2.遵循试剂盒生产商提供的操作规程,按照说明书中的步骤进行操作。

  3.试剂盒的保质期和储存条件也会影响其专一性,应严格遵守生产商的要求。

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于小鱼鱼1998

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通过以下几个指标验证

最检测限;回收率;交叉反应率;标准曲线图谱及数据,标准曲线至少由5个浓度组成;IC50测定值及变形曲线点数目

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Topmicro

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1.利用干扰实验:将针对试剂盒特异性的重组蛋白抗原与试剂盒中的检测抗体混合孵育,然后按照试剂盒说明书进行操作,观察标准曲线的线性性。如果标准曲线良好,说明试剂盒检测抗体针对的是非目的抗原,即该试剂盒为伪劣假造ELISA试剂盒。

2.利用交叉实验:购买两盒同一公司的ELISA试剂盒A和B,分别用它们的标准品进行实验并绘制标准曲线。如果两个试剂盒的标准曲线一致,说明它们检测的是同一个指标,即这两个试剂盒为伪劣假造ELISA试剂盒;如果标准曲线不一致,说明它们检测的是不同指标,即为正常的ELISA试剂盒。

3.免疫沉淀和免疫印迹分析:使用针对同一蛋白的不同表位抗体进行免疫沉淀和免疫印迹分析,通过识别特异的目标条带来验证抗体的特异性。抗体必须能够识别特定的目标条带,并表现出最小的交叉反应性,才算合格。

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Keven轩

有帮助

可以选取阳性样本和阴性样本进行实验

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