检测细胞活性氧（羟基自由基），用APF探针，拍不出来，步骤如下

阳性药物作用时间可能需要延长，8小时可能不够。

建议延长孵育和光照时间，然后再进行探针检测

根据你提供的使用APF探针检测活性氧的步骤,没有得到阳性结果,可能的原因和建议如下:

1. APF探针的浓度可能需要优化,5μmol/L可能偏低,可以试试10-20μmol/L。

2. 阳性药物的浓度和作用时间可能需要重新确定,8小时可能不够或过长。

3. APF探针作用时间也需要优化,通常设置30-60min。

4. APF探针作用需要避光,确认这一步是否在黑暗中进行。

5. 确保已经对阳性对照组进行了验证,以确定方法本身可行。

6. 洗涤时漏失了细胞,可以加入聚赖氨酸,提高细胞黏附。

7. 需使用配有适当滤光片的荧光显微镜观察,确认配置正确。

8. 增加重复次数,并设阴性对照组以验证结果。

9. 尝试其他活性氧检测试剂,如DCFH-DA等进行验证。

10. 检查细胞状态,活性氧水平可能因状态不同而难以检测。

综合优化各步骤参数,增加验证试验,应能提高结果可靠性。