MitoSOX 测定线粒体活性氧

线粒体的主要 ROS 类型是线粒体氧化磷酸化（OXPHOS）副产物超氧阴离子。MitoSOX 是一种选择性在线粒体内长期滞留而不外漏的染色剂，其进入细胞后，会被线粒体内超氧阴离子氧化产生红色荧光。探针的这种氧化过程可被超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）抑制。因此，MitoSOX 可高选择性的用于检测活细胞线粒体内 ROS。

DMEM 培养基（根据细胞选择合适培养基）、无菌 PBS

移液器、无菌枪头、细胞计数板

MitoSOX 试剂盒、流式细胞仪

（1）准备待检测细胞，计数细胞，调整细胞数量为 1×10⁶ 个/mL；

（2）PBS 润洗三次，加入新鲜 DMEM 培养基（根据细胞选择合适培养基）；

（3）加入终浓度为 5 μM 的 MitoSOX 探针，室温下避光孵育 30 min；

（4）PBS 润洗三次，去除细胞外残留 MitoSOX 探针；

（5）加入无酚红 DMEM 培养基（根据细胞选择合适培养基），流式细胞仪检测。

（1）实验前 30 min 对细胞间及超净台进行充分紫外照射；

（2）进入细胞间更换无菌衣，无菌拖鞋等；

（3）保证细胞数量 1×10⁶ 个/mL，便于后续观察统计；

（4）孵育过程全程避光，每隔 3~5 min 轻柔颠倒混匀，使探针与细胞充分接触；

（5）孵育结束后，PBS 充分润洗，无酚红培养基重悬细胞。