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MitoSOX 测定线粒体活性氧

相关实验:活性氧自由基和清除体系活性分析

别名:Detection of mitochondrial reactive oxygen species (ROS) by MitoSOX

最新修订时间:

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原理

线粒体的主要 ROS 类型是线粒体氧化磷酸化(OXPHOS)副产物超氧阴离子。MitoSOX 是一种选择性在线粒体内长期滞留而不外漏的染色剂,其进入细胞后,会被线粒体内超氧阴离子氧化产生红色荧光。探针的这种氧化过程可被超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)抑制。因此,MitoSOX 可高选择性的用于检测活细胞线粒体内 ROS。

材料与仪器

DMEM 培养基(根据细胞选择合适培养基)、无菌 PBS

移液器、无菌枪头、细胞计数板

MitoSOX 试剂盒、流式细胞仪

步骤

(1)准备待检测细胞,计数细胞,调整细胞数量为 1×106 个/mL;

(2)PBS 润洗三次,加入新鲜 DMEM 培养基(根据细胞选择合适培养基);

(3)加入终浓度为 5 μM 的 MitoSOX 探针,室温下避光孵育 30 min;

(4)PBS 润洗三次,去除细胞外残留 MitoSOX 探针;

(5)加入无酚红 DMEM 培养基(根据细胞选择合适培养基),流式细胞仪检测。

注意事项

(1)实验前 30 min 对细胞间及超净台进行充分紫外照射;

(2)进入细胞间更换无菌衣,无菌拖鞋等;

(3)保证细胞数量 1×106 个/mL,便于后续观察统计;

(4)孵育过程全程避光,每隔 3~5 min 轻柔颠倒混匀,使探针与细胞充分接触;

(5)孵育结束后,PBS 充分润洗,无酚红培养基重悬细胞。

来源:丁香实验

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