土井挞克树
蛋白丰度较低,可能是细胞裂解的不够充分,这时候需要更换裂解液,如果裂解充分建议还是增加细胞含量
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如果蛋白丰度较低,除了增加细胞投入量外,还可以采用以下方法来提高目标蛋白的丰度:
优化表达系统:可以通过优化表达载体、宿主细胞、培养条件等来提高目标蛋白的表达量。例如,选择高表达载体、高表达宿主细胞、优化培养条件等方法。
优化诱导条件:对于需要诱导表达的蛋白,可以通过优化诱导条件来提高目标蛋白的表达量。例如,优化诱导剂的浓度、诱导时间、温度等条件。
采用亲和层析纯化:采用亲和层析纯化可以从复杂的混合物中高效地富集目标蛋白。例如,使用His-tag或者GST-tag等亲和标签来纯化目标蛋白。
采用浓缩技术:对于蛋白浓度较低的样品,可以使用浓缩技术来提高蛋白的浓度。例如,使用超滤膜或者离心浓缩等方法。
优化染色条件:如果是在凝胶电泳中检测蛋白丰度较低,可以尝试优化染色条件,例如使用更敏感的染色剂或者增加染色时间等
赛默飞世尔科技
如果纯化所得蛋白量低,受诸多因素影响。比如,细胞裂解液不合适,或者没有添加抑制剂,导致靶蛋白或者饵蛋白构象改变不能结合或降解;饵蛋白较难洗脱,换成高强度的洗脱缓冲液;选用的抗体不合适,建议使用IP验证过的抗体并优化抗体用量;蛋白间为弱相互作用,或者相互作用依赖翻译后修饰等等。
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