dxy_828rqlo6
最近跑脊髓还有神经组织的这个蛋白,分子量131kda,条带一直出不来,10%的胶,恒流,转膜条件300ma恒流90分钟,封闭条件5%BSA室温2小时。图二是增加上样量
后期按照大家的建议更改了转膜液配方不加甲醇,加SDS,转完marker直接消失,爆片直接白膜了,求助!
z流沙z
我跑过差不多大小的,8%的胶,80v 40min+130v 60min,差不多就够了,然后转膜200mA 2h也够了,建议牛奶封闭1-2h。另外建议跑不出来的时候,极限增加上样量,一个是样品浓度要高,一个是增加上样,可以上40-50ul
sswei
建议:1:提高蛋白上样量;2:摸索转膜条件,别转过了。
毛利小五郎的徒弟
更换抗体,目前看抗体的特异度不够,建议更换
loveliufudan
建议考虑以下几个方面:
Western转膜液配方:可以尝试调整Western转膜液的配方和浓度,根据不同蛋白的性质和转膜条件进行优化,例如增加SDS的浓度和pH,缩短转膜时间等。同时,建议使用标准的蛋白质标记物,以确保转膜条件的稳定性和准确性。
蛋白样本的制备:对于iNOS蛋白的检测,建议使用含有蛋白酶抑制剂的提取缓冲液,避免蛋白的降解和失活。同时,应注意样品的含量和质量,以免过多或过少的样品影响实验结果。
抗体的选择和条件优化:针对不同蛋白的特性和检测方法,选择适合的一抗和二抗,以保证实验的准确性和可重复性。同时,应注意调整抗体的稀释倍数和反应时间,以充分发挥其检测效果。