dxy_qm5pru32
求问各位,已知shRNA敲低的质粒带puro和GFP,用收的病毒上清感染细胞,两天之内细胞都带上了绿色荧光,但是第三天加嘌呤霉素1ug/ml筛选后细胞全死了,这是细胞没感染成功吗?
还有就是下一步是直接重新包病毒还是再用这个病毒上清感染细胞做一个嘌呤霉素梯度筛选呢
毛利小五郎的徒弟
建议梯度筛选,很显然你的浓度有问题,这个时候贸然增加或减量都不正确
huarenqiang5
考虑可能是加入嘌呤霉素的量太大或浓度过高导致。建议降低浓度和减少剂量重新试试。
balalaLy
可能是嘌呤霉素的浓度太高了,建议针对此细胞再做一次筛选。
loveliufudan
看到细胞在两天之内都有了绿色荧光,这说明细胞已经感染成功了,并且细胞对于GFP蛋白是有反应的。
第三天加入嘌呤霉素筛选后,细胞全死了,这可能是因为细胞中的puro基因在嘌呤霉素的作用下被抑制,导致细胞的死亡。
因此,下一步可以先考虑重新包病毒,或者通过嘌呤霉素梯度筛选,来找到一个抑制质粒中puro基因的最低剂量,以避免细胞死亡。
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