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每次做WB实验的时候 我会把冻在-40℃的蛋白样品取出,磨碎后加上裂解液,金属浴95℃煮20分钟。煮过后的样品用完了继续放回-40℃里面,下次跑WB的时候直接取。但是用了几次就会发现蛋白样品降解了,所以想请问一下大家,我的操作方法有没有什么改进,可以减慢样品的降解呢?煮好的蛋白样品一般可以用几次呀?
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加入蛋白酶和磷酸酶抑制剂,这样可以有效延长样本使用时间
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我们平时提蛋白的话,是把蛋白煮了再冻存
天一湖医者
尽量操作环境保持低温(如相关的器材预冷),添加合适的蛋白酶抑制剂,特别是在细胞或组织破碎的过程中要注意环境低温。
木木的虾
我们用的脂肪体,提蛋白时会在裂解液中加蛋白酶抑制剂(你可以试一下好一点的cookie),提完之后加入SDS上样缓冲液煮沸,然后放入-20.
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可以在裂解液中添加蛋白酶抑制剂,蛋白样品煮沸后分装,可多次使用