ELISA检测稳定性实验如何设计？

(1)正式实验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制实验条件，待检样品应做一式二份，以保证实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特异性反应，可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。
(2) 在ELISA中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括以下几点。
①固相载体的选择。许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一，据此判明其吸附性能是否良好。
②包被抗体(或抗原)的选择。将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时，要求纯度要好，吸附时-般要求pH在9.0-9.6之间。吸附温度、时间及其蛋白量也有一定的影响，一般多采用4℃18-24h。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.lμg/mL、1.0μg/mL和10μg/mL等)进行包被后，在其他实验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说，通常为1-10μg/ mL。
③酶标记抗体工作浓度的选择。首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部分)。然后再固定其他条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
④酶的底物及供氢体的选择。对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显的显色反应，而本身无色。有些供氢体（如OPD等）有潜在的致癌作用，应注意防护，有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间以10-30min为宜。底物使用液必须新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入。

可以参考下这篇文章《ELISA实验设计思路、基本步骤以及注意事项》