蛋白电泳完成去吃饭了，2h后回来才转膜，或者转膜完成，去干啥了回来才封闭。中间停留时间有没有影响？

没啥太大影响。放那就行，别太长时间，我之前经常总这样。

停留几小时内是没问题的，不过夜问题不大。

电泳跑完不能及时的转印，胶里面的蛋白会有自由扩散，后面做显影会有些弥散的现象，转膜完成后隔短时时间操作，影响小一些，不过实验进程还是应该按照sop去做，减少体系的不稳定性和变量，能得到更好的实验结果

中间停留后蛋白在凝胶中是会弥散的，通常都是完成电泳后就尽快转膜，否则弥散后，有些实验结果就无法判断了。如果时间确实不合适，建议：1.改变电泳的时间，例如把做好的凝胶在4C，泡缓冲液中保存（当然，这个时间也不建议太长，过夜什么的还行，要是几天就不太好了），等到时间充分的时候再电泳。2.或者如果时间差的不太多，可以把电泳的电压稍微调低点，跑慢点，处理完其他事情再来转膜。总体来说，电泳后尽快转膜。

你最好把电压调小，然后回来转膜，别把胶放时间太长，会弥散。转膜完成，只要泡在Western转膜液中不拿出来，问题不大

原理上其实没关系，因为你的膜一直在活化中，应该没关系

有没有留意一下marker有没有弥散，如果没有的话就还好。建议以后不要在电泳液中放置太久。宁愿电泳跑慢一点

应该影响不是很大，但是也不是绝对的。

转膜只要不把膜拿出来就没有问题，电泳的话建议不要停太久，蛋白会弥散。