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求问大佬NLRP3相关通路的wb步骤
核糖核酸少糖少酸
1：就是NLRP3，IL—18，Caspase的这种相关性的条件都附图。
2：NLRP3采用的是8%的胶，其他2个是12%，条件跑IL—1贝塔还是很稳定。
电泳浓缩80v，分离120v，转膜260ma
3：想请教一下这种出现这么弱是什么问题呢？
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3 个回答
superpw
有帮助
NLRP3与炎症有关，并且依赖于细胞类型。该抗体在大多数非病变组织样品和未经处理的细胞裂解物中检测不到信号或非常弱的信号。在大多数样品中，可能需要刺激才能检测NLRP3蛋白，如文献所述(PMID: 29070054, 29434227和22569257)。另外nlrp3属于比较难转膜的蛋白，需要转膜的时间较长。
麻黄连翘赤小豆
有帮助
NLRP3和Caspase 两个条带显示蛋白有降解，其他蛋白还好，蛋白降解一个是冻融次数多，还有就是保存时间过长，新鲜组织的蛋白一般降解不多，可以重新做后两个蛋白。前面三个蛋白如果不稳定还是看是不是上样时样品不均一，没有摇匀等问题
核糖核酸少糖少酸
我还想请问一下您就是，我这个是细胞的，然后就是封闭是用牛奶4个小时，上样量是在40ul，浓度也是，这样子是属于降解吗？因为跑其他的时候就很清晰
毛利小五郎的徒弟
有帮助
这个弱表现，弱表现出现可能是因为转膜效率低
可能原因解决方案转膜缓冲液PH值与目的蛋白等电点相近提高转膜缓冲液PH值凝胶与转印膜之间存在气泡转膜时应排除所有气泡凝胶与转印膜两侧滤纸大面积接触滤纸、转印膜裁剪与凝胶大小相等
转印膜种类选择不当使用质量可靠的PVDF或者NC膜电压或者电流过小调高电压或者电流转印时间过短或者过长根据蛋白大小和装置类别选择合适的转印时间湿转过程中温度过高使用预冷的Western转膜液，湿转置于冰水中
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