【求助】关于WNT通路相关的实验设计

各位信号转导版的老师，牛人，大家好，提前祝大家端午快乐！
学生有个问题咨询下大家，

我是研一的肝胆外科的研究生，这段时间设计课题，也看了一些文献，实验室的老师建议做做肝癌的WNT通路方面的。WNT激活能够引起相关的MMP cyclinD cd44 VEGF等等相关的细胞增殖和转移的促进。我想的是设计实验阻断wnt通路，以求降低beta-catenin的水平和入核内激活相关癌基因的转录水平。然后检测胞内的磷酸化和非磷酸化的catenin的量，还有相关增殖凋亡和转移方面的蛋白或者基因的变化。选比如vegf mmp-7 bax cycling D等。然后验证性地证明阻断WNT对肝癌的治疗和预防复发有用。和实验室老师讨论了下认为也可以。

但是问题是昨天查询了一天相关抑制剂的价格，WNT的抑制因子wif，DKK，frizzled的抑制剂或者dsh的，都非常的贵，有的3千多，有的高达8千多！这对我们没有科研基金（只有公费的6千元钱。两个同学加在一起也大概1万元钱）的学生来说看来是根本不可能的了。

而其它的抑制剂，又相关实验报道，布洛芬等抗炎药能够降低肝癌的beta-catenin的水平和转位，从而抑制cyclinD和c-myc的表达，抑制细胞的增殖，文献说其作用可能与WNT有关。但说其分子机制还需要进一步证实。胃癌中也报道有同样的效果。吲哚美辛和苏林酸等在体内外均能抑制beta-catenin tcf的活性。内皮抑素说能够在WNT中促进catenin的讲解抑制cyclinD1的转录，还有就是格列卫，geleevec，选择性的酪氨酸激酶抑制剂，能够增强e-cad和catenin的结合，调整beta-catenin核内外的分布，下调beta-catenin的水平。降低tcf/lef的活性。

还有相关的中药提取物能够降低beta-catenin的水平，比如报道有槲皮素。

我应该怎么选择呢？请各位老师和大牛指教！做这条通路还是不做？选内皮抑素、格列卫、cox抑制剂这些还是？

另，在肝癌细胞中AXIN基因是突变的，大肠癌中apc是突变的，尽管有文献说在突变的大肠癌中抑制wnt通路，还是能够降低beta-catenin的水平。但在肝癌中是否会有明显
结果还是有点担心。

谢谢大家，真心向大家请教。QQ674693586

自己顶一下，希望高手前来！~

你这些经费根本做不了这些实验。

一万元钱也就够检测两三个western蛋白的。估计意义不大。

找个地方合作

也有便宜的办法可以阻断WNT通路活性的。WNT通路的最终活性取决于b-catenin/TCF4的转录活性。
1.选择RNAi下调b-catenin的表达，由于经费不多，可以找人要b-catenin的RNAi质粒，许多实验室有，可以发EMAIL找老外要。
2.找人要deltaN TCF4质粒（dominant negative of TCF4），该质粒同样可以有效阻断WNT活性。

记得做实验前，先检测一些肝癌细胞系的WNT通路的活性，有许多方法，建议看文献。选择WNT异常激活的肝癌细胞系做阻断实验，然后检测下游改变及细胞生物学改变。
印象中WNT通路在肝癌中是不是有发表啊？很长时间没关注了，建议先查文献，别做了一堆别人发表过的东西。

但愿有所帮助，祝研究顺利！

选WNT抑制剂的话，一般那几个比较好用？做WB的话，选哪几个蛋白？谢谢。