丁香实验_LOGO
登录
提问
提问
我要登录
|免费注册
丁香通

跑wb遇到了一些问题?

相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

user-title

dxy_btpk2zd7

想验证不同细菌感染量对免疫细胞的炎症因子或蛋白的表达,跑wb没跑出来内参的条带是什么原因?目标蛋白跑出来了

wx-share
分享

3 个回答

user-title

juyue2010

有帮助

查询一下这种细胞常用内参,可能是你稀释比例有问题,或抗体失效

user-title

毛利小五郎的徒弟

有帮助


这种情况一般不会出现,因为内参几乎是在任何组织中都强表达。
1 你的目的、内参的分子量分别是多少?膜的孔径多大,转膜电压及时间?这些都可能影响到条带。如果分子量小,膜孔径大,转膜电压高,时间长,有可能把小分子的蛋白转过。
2 还有一抗稀释度太大,试试减小稀释度,做个一抗梯度
3 不建议封闭过夜,一般封闭一小时
4 一抗一小时以上,然后4度过夜

user-title

balalaLy

有帮助

处理对内参蛋白表达有影响,换一种内参。或者你的抗体失效了 。

提问
扫一扫
丁香实验小程序二维码
实验小助手
丁香实验公众号二维码
关注公众号
反馈
TOP
打开小程序